食品中沙门氏菌LAMP快速检测方法的建立
2012-07-19黄金海孙跃辉庄世文王静思
天津大学学报(自然科学与工程技术版) 2012年5期
黄金海,孙跃辉,陈 瑞,庄世文,刘 莹,王静思
(1. 天津大学化工学院,天津 300072;2. 华南农业大学动物医学院,广州 510642)
沙门氏菌是肠杆菌科中一大类重要的食源性致病菌,沙门氏菌引起的中毒病例位居世界各地食物中毒的首位.WHO食源性疾病监控计划显示,欧洲每年约有160,000人感染沙门氏菌,大约每 100,000人中有 35人感染[1],每年用于沙门氏菌的防控和治疗费用高达28亿欧元[2].在我国,70%~80%细菌性食物中毒事件是由沙门氏菌引起,引起沙门氏菌中毒的食品中,约90%是肉、蛋、奶等畜产品[3].沙门氏菌感染畜禽后可引发一系列疾病,在动物屠宰过程中,肠道中的致病菌会污染屠宰环境或被带到内脏与体表,成为畜禽肉胴体、畜禽产品污染的重要来源[4-5].卫生检测要求中,世界各国普遍规定食品中不得检出沙门氏菌.
沙门氏菌传统的检测方法大多采用细菌分离、生化鉴定表型方法、基于抗体的免疫学方法等,在快速、敏感与特异性等方面有局限性[6].PCR法需要昂贵的循环仪,不适于基层快速检测.环介导等温扩增技术(loop-mediate isothermal amplification,LAMP)是一种新颖的核酸扩增技术,它依赖于识别靶 DNA上6个特定区域的4条引物和具有链置换活性的Bst DNA聚合酶,在恒温条件下高效扩增核酸,反应结果可通过肉眼观察,具有高特异性、快速灵敏、操作简单等特点.自 2000年该技术开发以来,LAMP技术在临床疾病的诊断、流行性细菌以及病毒的检测等方面应用广泛[7-9].笔者针对沙门氏菌侵袭性因子 A基因(invA)设计一套 LAMP引物,对 7种血清型的沙……
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