张培环

环孢霉素A（cyclosporine A，CsA）是一种高效免疫抑制药，临床上广泛应用于预防器官移植的排斥反应和自身免疫性疾病的治疗。CsA检测方法有多种，本文通过化学发光微粒 子 免 疫 分 析 （chemicalluminescencemicro-particle immune analysis，CMIA）与荧光偏振免疫分析（fluorescence polarization immunoassay，FPIA）检测 CsA血药浓度，比较其结果的偏倚及相关性。

1 材料与方法

1.1 标本 2011-06～2011-07在笔者所在医院复查CsA浓度的肾移植患者全血样本40份，其中男24份，女16份；年龄18~69岁。标本采集时间：口服CsA后10~12 h，采集静脉血4 ml，分2管，EDTA-K2抗凝。标本存放时间室温（20~25℃）不超过2 h，当日检测。

1.2 方法 仪器选用ARCHITECTi1000分析仪与AXSYM分析仪，均为美国雅培公司产品。ARCHITECT分析仪检测原理基于化学发光微粒子免疫分析，AXSYM分析仪检测原理基于荧光偏振免疫分析。试剂分别为雅培公司配套的试剂盒，均在有效期内应用。以FPIA检测结果为X轴，CMIA检测结果为Y轴，通过Deming法进行回归分析[1]。

表 1 CMIA和FPIA检测结果（n=40）

2 结 果

40份标本分别用CMIA和FPIA方法检测，结果存在偏倚,二者的平均浓度偏倚为-42.6 ng/ml，CMIA检测结果比FPIA检测结果普遍偏低。见表1。检测浓度范围20~230 ng/ml的样本时，Y=0.88X－27.13，相关系数≥0.9（表 2），说明二者存在相关性。散点分析图见图1。

表 2 CMIA与FPIA检测环孢霉血药浓度的比较

图 1 散点分析图

3 讨 论

CsA是用于器官移植中预防排斥反应和治疗自身免疫性疾病的有效免疫抑制药[2]。由于血CsA浓度治疗窗狭窄[3]、个体差异、器官移植后时间、其它药物的结合应用等多种因素的存在，临床要求器官移植术后定期测定CsA血浓度，为临床调整免疫抑制药物的治疗方案提供参考。

CsA浓度检测方法较多，有高效液相色谱法（HPLC）、高效液相质谱联用法（HPLC/MS）、放射免疫法（RIA）、FPIA 等。不同的检测方法之间存在很大的偏倚，此次实验CMIA原理采用的是两步法，第一步是包被CsA抗体的顺磁微粒与待测标本反应，第二步是添加CsA吖啶酯标记结合物，如待测标本中含CsA较高，则CsA吖啶酯标记结合物与顺磁微粒的结合量少；如待测标本中含CsA较低或不含CsA，则CsA吖啶酯标记结合物与顺磁微粒的结合量多，测量其产生的化学发光反应。FPIA采用的是竞争法，即待测标本与分析物示踪剂竞争与CsA抗体结合，如果待测标本含CsA较高，则很多分析物示踪剂无法与CsA抗体结合，在收到偏振垂直光激发后，这些小的荧光分子快速旋转，向各个角度发射荧光，结果导致偏振光下降；如如待测标本中含CsA较低或不含CsA，则分析物示踪剂与CsA抗体结合，这些结合物分子量大，旋转较慢，以致于光向单一角度发射，结果导致偏振光增强。此两种方法均为免疫检测法，由于其是非特异性的，可与代谢物发生交叉反应。目前已知的环孢霉素代谢物有30多种[4]。有资料显示，部分代谢产物有免疫抑制活性，两个主要活性代谢物AM1和AM9其免疫抑制活性占母体作用的10%~20%[5]。由雅培CsA测定试剂盒特异性一节可知，ARCHITECT环孢霉素项目与CsA代谢产物的交叉反应率要比AxSYM低，其抗体特异性比AxSYM要高，所以ARCHITECT系统测试结果普遍低于AxSYM系统测试结果，二者的平均浓度偏倚为-42.6 ng/ml。由此可以看出，方法学的不同及与代谢产物发生交叉反应的非特异性是产生偏倚的主要原因。

由表2可以看出，检测浓度范围20～230 ng/ml的样本时，相关系数≥0.9，二者之间存在相关性，但由于样本量大小和样本群体的差异等变量会影响检测相关性，因此，各个实验室得到的结果可能会与这些数据存在差异。

根据本文检测结果，得知目前常用的此两种仪器的检测结果存在偏倚，这可能也给临床医师的治疗带来一定的困惑。有些建议应用校正系数达到二者之间的结果互换使用，但笔者认为，由于临床状态的复杂性，最好建立不同方法的参考范围，建议单个患者连续使用同一种检测方法，或者是连续在同一个实验室检测，医师应根据患者情况及临床经验确立单个患者的血药浓度范围。

[1]Passing H,Bablok W.A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods[J].J Clin Chem Clin Biochem,1983,21(11):709-20.

[2]Cohen DJ,Loert Scher R,Rubin MF,et al.Cyclosporine A:a new immuno-suppressive agent for organ transplantation[J].Ann Inter Med,1984,101（24）:6671.

[3]Julia M.Potter pharmacoeconomics of therapeutic drug monitoring in transplantation[J].Therapeutic Drug Monitoring,2000,22（4）：361.

[4]Christians U,Sewing KF.Cyclosporin metabolism in transplant patients[J].Pharmac Ther,1993,57（3）:291-345.

[5]朱有华，石炳毅．肾脏移植手册[M]．北京：人民卫生出版社，2010.7-243.