广西人口和计划生育研究中心 莫 毅

广西畜牧研究所 梁方方＊ 赖志强 卢玉发 廖玉英 何仁春 黄丽霞

华南农业大学动物科学学院 杨 琳

木聚糖酶能够降解饲料中的木聚糖，提高饲料利用率，降低畜禽肠道内饲料的黏度，从而提高饲料的有效能值和改善动物消化道的内环境，促进动物生长（张晓晖等，2007）。但由于从自然环境中筛选所获得的木聚糖酶产生菌存在产量低，木聚糖酶不易分离纯化、稳定性差、不同来源的酶适应性不同等不足，在一定程度上限制了木聚糖酶的动物饲料添加剂中的实际应用 （阮同琦等，2008；陈丛瑾等，2007）。

毕赤酵母 （Pichia pastoris）是一种高效的真核表达系统，该系统不仅克服了原核表达系统产物不易分离纯化和不能保持重组蛋白活性等缺点，且可对翻译后的蛋白进行适度糖基化修饰、折叠、加工，使生产的蛋白具有天然的高级结构及生物学活性（Anjali等，2009；Su 等，2007）。 此外，毕赤酵母具有遗传稳定性强，外源蛋白的表达基因操作简单、外源蛋白能正确加工与修饰、表达量高、易大量发酵培养、内源性蛋白分泌少和易纯化等优点，使得毕赤酵母成为目前应用较广的分泌型真核表达系统（Cereghino和 Cregg，2000）。本文通过将编码枯草芽孢杆菌 （Bacillus subtilis strain GD3b）木聚糖酶（Xyn B）基因，克隆到 pPICZa A载体中，构建分泌型毕赤酵母表达载体pPICZa-Xyn B，重组质粒经线性化转入毕赤酵母X-33，经筛选获得可分泌表达Xyn B重组蛋白的毕赤酵母工程菌 X-33/Xyn B（莫毅等，2011）。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 质粒和菌株 大肠杆菌株E.coli.DH5a，毕赤酵母菌株X-33和重组质粒pUC-Xyn B由本实验室保存；……