杨晓燕，刘 航，杨顺利，尹双辉，尚佑军，田永强

（1.兰州交通大学化学与生物工程学院，甘肃 兰州 730070；2.中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原学国家重点实验室，甘肃 兰州 730046）

猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）是目前发现的最小的动物病毒[1]，属于圆环病毒科（Circoviridae）圆环病毒属（Circovirus），病毒基因组为无囊膜的单股环状DNA病毒。病毒颗粒平均直径为17nm，呈20面体对称[2]。根据PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列，将PCV分为PCV1和PCV2两个基因型，基因组大小约为1.7kb，其中PCV1对猪为非致病性，但广泛存在猪体内及猪源代细胞系。PCV2感染常常被认为可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、皮炎肾病综合征、增生性坏死性肺炎、猪繁殖与呼吸综合征、仔猪传染性先天性震颤等多种疾病，但临床上以PMWS最为常见[3-5]。

PCV2的ORF3基因是除ORF1、ORF2外较大的阅读框[6]，位于基因组671～357 bp位碱基(复制起始点作为序列起始)，大小为314 bp，编码104个氨基酸。ORF3对应着ORF1（Rep蛋白氨基酸103～207 aa）的反向互补序列和Cap蛋白B淋巴细胞抗原表位（185～211 aa），与ORF2蛋白的一个 T淋巴细胞抗原表位共用201～211 aa，功能尚不完全清楚[8]。而其他阅读框编码产物的功能和特性目前尚不清楚。为了探讨ORF3基因结构及其与功能的关系，研究以实验室分离的PCV2菌株为材料，对ORF3基因进行完整克隆，并在大肠杆菌中克隆表达。

1 材料与方法

1.1 病毒、菌株与基因

实验室保存的从临床表现为PMWS仔猪脾脏中分离的PCV2毒株；大肠杆菌 JM109，BL21（DE3）菌株，载体 pGEX-6p-1（Invitrogen公司）。

1.2 酶与试剂

引物、PCR试剂、DNA片段回收试剂盒、质粒提取试剂盒（大连宝生物有限公司）；T4 DNA连接酶、BamH I、Sal I限制性内切酶，Taq酶（promega公司）；……