拟南芥类锌指基因AT3G02790/AT5G16470纯合双突变的筛选及其表型分析1)

2012-07-02郑唐春施晓文

东北林业大学学报 2012年9期

郑唐春施晓文

(林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学)，哈尔滨，150040)(吉林省林业勘察设计研究院)

臧丽娜朱银凤王亚军曲冠证

(林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学))

锌指基因是一类广泛研究的抗逆相关基因，广泛分布在动物、植物和微生物中［1］。锌指蛋白的共同特征是蛋白质通过与Zn2+的结合，使自身折叠成指状的多肽结构。锌指蛋白通过与靶分子DNA、RNA、DNA－RNA的序列特异性结合，以及与自身或其它锌指蛋白的结合，在转录和翻译水平上调控基因的表达水平［2－3］。目前，利用反向遗传学的方法探索基因的表达规律，研究基因功能的报道越来越多。拟南芥AT3G02790和AT5G16470基因被归属为锌指基因家族，CLUSTALW程序分析结果表明，其核酸序列相似性达到81%，这两个同源基因可能参与拟南芥植株的生长过程。本文以拟南芥AT3G02790和AT5G16470纯合单突变株为亲本(均为T－DNA插入突变体)，采用人工杂交技术获得杂合子后，根据基因分离定律，结合PCR检测技术，经多轮PCR检测后获得纯合双突变株。并初步分析了纯合双突变株的表型，为下一步反向遗传学探究该类锌指基因功能提供试验材料，同时也表明用杂交技术获得拟南芥多基因突变体是可行的。

1 材料与方法

1.1 试验材料

材料为从拟南芥生物资源中心(Arabidopsis Biological Resource Centre，ABRC)购买的编号为CS－851718和SALK－091992拟南芥种子。通过筛选与扩繁获得AT3G02790和AT5G16470纯合单突变的种子(原种为Columbia－0型)。rTaq酶、DNA marker、SYBR Premix EX TaqⅡ等PCR相关试剂购自TaKaRa公司(中国大连)，EasyPure Plant RNA Kit购自全式金公司，其它试验试剂均为国产或进口分析纯。