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聚合酶链反应技术诊断淋病的体会

2012-06-25闫鑫

实验与检验医学 2012年3期
关键词:检测

闫鑫

(莘县人民医院检验科,山东 莘县 252400)

2009年1月至2011年1月,我科采用聚合酶链反应技术(PCR)检测淋病标本1568份,现将检测结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 本组泌尿生殖器分泌物采集标本共1568例,均来自于我院泌尿外科和妇科门诊病例。其中男性标本656例,女性标本912例。年龄18~60岁,其中18~30岁526例(33.55%);31~40岁437例(27.87%),41~50岁386例(24.62%),51岁以上者219例(13.97%),本组均为有淋病症状的疑似病人。职业类别:从事休闲服务业如美容美体业、发廊、男士或女士会所、酒店、宾馆、足浴、按摩房、洗头房等从业人员625例(39.86%)。进城务工人员585例(37.31%),个体商户、企业老板、经理类人员148例(9.44%),流动人口无固定职业人员178例(11.35%),公职干部、职员类人员32例(2.04%)。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集 女性未婚者取其尿道口及阴道口周围脓性分泌物,女性已婚患者在拭净宫颈表面分泌物后,用无菌拭子插入宫颈管1~2cm,转动2周取出拭子。男性患者拭净茎头后将拭子插入尿道1.5cm 取材。

1.2.2 检测方法 取分泌物于500μl 生理盐水中,14000r/min 离心5min,弃上清液,用50μl 裂解液悬浮沉淀,100℃15min,14000r/min 离心5min,取上清液2μl 做PCR反应模板。取出已分装有PCR 混合物的离心管,室温融化,离心数秒。在PE480型微电脑扩增仪上进行扩增,条件为94℃45s,55℃45s,72℃45s,共35个循环。取10~15μl 扩增产物于2%的琼脂糖凝胶上进行电泳,以溴化乙锭染色在紫外线灯下观察到400bp的DNA 片段即为淋病奈瑟菌(NG)PCR 阳性。每批标本扩增同时行阳性对照(2μl 阳性模板)和阴性对照(2μl 双蒸水)。

2 结果

2.1 泌尿外科就诊的男性受检者656人,年龄最小18岁,最大60岁,PCR-NG 阳性者246人,阳性检出率为37.5%;各年龄组阳性率见表1。

2.2 妇科门诊就诊女性受检者912例,年龄最小21岁,最大56岁,PCR-NG 阳性312例,阳性检出率为34.21%;……

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