贺荣芳，赵 强，谢黎明，龚邵新，胡义艳，张小丽，阳 帅，唐运莲

(1.南华大学附属第一医院病理科，湖南 衡阳 421001；2.南华大学附属第一医院肿瘤内科，湖南 衡阳 421001；3.南华大学肿瘤研究所，湖南 衡阳 421001)

淋巴瘤是指来源于淋巴细胞及其前体细胞的恶性肿瘤，在我国占所有恶性肿瘤的3%～4%，且近年来其发病率呈明显上升趋势。恶性淋巴瘤种类繁多，T细胞与B细胞淋巴瘤在病理形态、免疫表型、临床特征、治疗方法和预后等方面都有很大差别。T细胞淋巴瘤在西方国家比较少见，而在我国却比较常见。Survivin是凋亡抑制蛋白家族中分子量最小的一员，被认为是迄今发现最强的凋亡抑制因子。研究表明Survivin在多种肿瘤中异常高表达，且与肿瘤的发生发展及预后密切相关[1-2]。PLK1是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，具有调控细胞周期与凋亡、促进肿瘤发生发展等多种作用。PLK1在多种肿瘤组织中过表达，且与肿瘤的转移、复发及预后差显著相关，已成为肿瘤诊治的新靶点。最新研究表明皮肤T细胞淋巴瘤中存在PLK1过表达[3]。在其他部位及其他类型的T细胞淋巴瘤中是否也存在PLK1蛋白过表达，尚未见相关文献报道。Survivin和PLK1因均与细胞周期与凋亡调控有关，且均作用于G2/M期而被学者们所关注。研究发现在肝癌细胞株BEL-7402中用RNA干扰技术抑制PLK1的表达后，细胞中Survivin蛋白表达下调，进而导致细胞G2/M期阻滞[4]。Feng等[5]在食管鳞状细胞癌中的研究也提示PLK1可能通过Survivin而发挥其抑制细胞凋亡、促进肿瘤发生发展的作用。但二者在T细胞淋巴瘤中的作用及相互关系尚未见文献报道。本研究旨在探讨T细胞淋巴瘤组织中Survivin、PLK1蛋白的表达，并探讨其表达与各临床病理参数之间的关系及二者表达之间的相关性，为进一步阐明T细胞淋巴瘤发生发展的分子机制及预后判断提供实验数据和理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2000-2011年南华大学附属第一医院病理科经病理组织学及免疫组化标记确诊为T细胞淋巴瘤的患者50例，男30例，女20例，年龄13～78岁，中位年龄45岁。患者临床、病理及实验室资料完整。病理类型和恶性程度按WHO(2008年)的标准分类。临床分期按AnnArbor分期标准。50例T细胞淋巴瘤患者中按年龄分类，45岁及以上者36例，45岁以下者14例；按发生部位分类，结内16例，结外34例；按恶性程度分类，高侵袭性4例，侵袭性26例，惰性20例；按临床分期分类，Ⅰ和Ⅱ期者33例，Ⅲ和Ⅳ期者17例。另取30例淋巴结反应性增生(RH)患者作为对照组，男16例，女14例，年龄8～74岁，中位年龄38岁。

1.2 方法 所有病理组织标本经4%甲醛溶液固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，每例均行苏木精-伊红(HE染色)和SP法免疫组织化学染色。0.01 MPBS(pH 7.4)液代替一抗作阴性对照。所用Survivin、PLK1抗体均为鼠抗人单克隆抗体均购自博奥森生物技术有限公司，通用型SP试剂盒及二氨基联苯胺(DAB)显色剂均购自北京中杉生物技术公司，染色步骤按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件进行分析，采用χ2检验，Survivin及PLK1蛋白表达之间的相关性分析采用Spearman等级相关性分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 Survivin和PLK1在T细胞淋巴瘤及反应性增生淋巴组织中的表达 Survivin蛋白阳性着色主要定位于细胞核中，Survivin在T细胞淋巴瘤中的表达阳性率为70.0%(35/50)，显著高于反应性增生淋巴组织(43.3%，13/30)(χ2=5.486，P＜0.05)。PLK1蛋白阳性着色定位于细胞浆中。T细胞淋巴瘤中PLK1蛋白表达阳性率为72.0%(36/50)，显著高于反应性增生淋巴组织40.0%(12/30)(χ2=7.900，P＜0.01)(见图1、图2)。

图1 免疫组化检测survivin在T细胞淋巴瘤及反应性增生淋巴组织中的表达(×400)

图2 免疫组化检测PLK1在T细胞淋巴瘤及反应性增生淋巴组织中的表达(×400)

2.2 T细胞淋巴瘤中Survivin、PLK1的表达与其恶性程度、临床分期的关系 惰性、侵袭性及高侵袭性淋巴瘤中Survivin蛋白表达阳性率分别为40.0%、88.5%、100.0%，经统计学分析，三组之间的表达差异有统计学意义(P＜0.01)。Ⅰ期和Ⅱ期患者Survivin蛋白表达阳性率为57.6%，而在Ⅲ期和Ⅳ期患者中的表达显著增高，阳性率为94.1%，经统计学分析，二者之间差异有统计学意义(P＜0.01)。

惰性、侵袭性及高侵袭性淋巴瘤中PLK1蛋白表达阳性率分别为40.0%、92.3%、100.0%，三组之间的表达差异有统计学意义(P＜0.01)。Ⅰ期和Ⅱ期患者PLK1蛋白表达阳性率为60.6%，而在Ⅲ期和Ⅳ期患者中的表达显著增高，阳性率为94.1%，经统计学分析，二者之间的表达差异统计学意义(P＜0.05)，见表1。

2.3 T细胞淋巴瘤中Survivin，PLK1的表达与性别、年龄、发生部位的关系 Survivin，PLK1蛋白在不同性别、年龄、发生部位中的表达差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

表1 T细胞淋巴瘤中Survivin，PLK1的表达与临床病理参数的关系

2.4 Survivin与PLK1在T细胞淋巴瘤中表达的相关性 经Spearman等级相关分析发现Survivin与PLK1蛋白的表达呈显著正相关(r=0.467，P=0.001)，见表2。

表2 T细胞淋巴瘤中Survivin与PLK1蛋白表达之间的关系

3 讨 论

Survivin是1997年美国耶鲁大学的Ambrosini等利用效应细胞蛋白受体-1(EPR-1)cDNA从人类基因组库中筛选出的一个基因。Survivin与细胞分裂、增殖有关，在成熟分化组织中不表达或弱表达，而在胚胎组织及肿瘤组织中表达。Survivin在细胞周期G2/M期呈高表达,可能通过直接抑制caspase23和caspase27而参与肿瘤的发生发展。研究表明,Survivin在多种肿瘤组织中表达上调,并且与肿瘤的组织学分级、临床分期、复发、转移及多药耐药密切相关[1-2,6-7]。本研究中Survivin在T细胞淋巴瘤中高表达，且与肿瘤恶性程度、临床分期显著相关；而与性别、年龄、发生部位无关。提示，survivin蛋白高表达可能是T细胞淋巴瘤发生发展的重要生物学标志。利用RNA干扰技术抑制Survivin的表达能诱导人HL-60白血病细胞发生凋亡[8]。Cheson等[9]研究建议在弥漫性大B细胞淋巴瘤Ⅱ期患者中可联合使用Survivin抑制剂YM155与利妥昔单抗。结合本实验，我们推测在T细胞淋巴瘤中survivin是否也可作为基因靶向治疗的目标。PLK1是细胞周期重要调控因子，许多调节细胞周期的重要分子Cdc2、p53、CyclinB1、Bcl-2等都是PLK-1的作用底物。在多种实体肿瘤组织中，如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、胶质瘤等均有过表达，且与这些肿瘤组织学分级、侵袭转移、临床分期及患者预后存在密切相关。本研究中，PLK1在T细胞淋巴瘤中显著高表达，且其高表达与肿瘤恶性程度、临床分期相关，而与性别、年龄、发生部位无关，提示PLK1蛋白高表达可能与T细胞淋巴瘤的发生发展密切相关。在T细胞淋巴瘤中检测PLK1蛋白表达情况可能对其诊断、治疗及预后判断具有重要意义。已有研究者以PLK1为靶目标对肿瘤进行治疗，结果都能有效抑制肿瘤细胞的增殖[10]。在T细胞淋巴瘤中PLK1也有望成为基因靶向治疗的目标。以上推测需进一步研究予以证实。

Survivin和PLK1均作用于G2/M期而调控细胞周期且均能抑制细胞凋亡而发挥促进肿瘤发生发展作用。He等[4]在肝癌细胞中研究发现Survivin蛋白是PLK1的靶基因之一。Feng等[5]发现在食管鳞状细胞癌中PLK1也可能通过上调Survivin表达而发挥其促进肿瘤发生发展的作用。Colnaghi等[11]也认为PLk1可能通过磷酸化Survivin而调控细胞周期。为此，我们采用了免疫组化方法在T细胞淋巴瘤中进行两者表达之间的相关性研究；结果显示Survivin、PLK1在T细胞淋巴瘤中均呈高表达，且两者的表达呈显著正相关。因此，我们初步推测，在T细胞淋巴瘤中Survivin蛋白可能是PLK1的靶基因之一，两者在T细胞淋巴瘤中可能发挥协同作用，相互促进肿瘤的发生发展。

总之，联合检测Survivin、PLK1对T细胞淋巴瘤的预后判断及指导治疗具有一定的现实意义，两者有望成为T细胞淋巴瘤新的预后判定标志物和基因靶向治疗的工具。但由于T细胞淋巴瘤的发生发展是多基因参与调节的复杂过程，Survivin、PLK1在T细胞淋巴瘤中的表达及其生物学功能与临床意义尚待进一步研究。

[1]Reis FR,Vasconcelos FC,Pereira DL,et al.Survivin and P-glycoprotein are associated and highly expressed in late phase chronic myeloid leukemia[J].Oncol Rep,2011,26(2)：471-478.

[2]Lu YH,Luo XG,Tao X.Survivin gene RNA interference induces apoptosis in human HL60 leukemia cell lines[J].Cancer Biother Radio Pharm,2007,22(6)：819-825.

[3]Nihal M,Stutz N,Schmit T,et al.Polo-like kinase 1(Plk1)is ex-pressed by cutaneous T-cell lymphomas(CTCLs),and its downregulation promotes cell cycle arrest and apoptosis[J].Cell Cycle,2011,10(8)：1303-1311.

[4]He Z,Wu J,Dang H,et al.Polo-like kinase 1 contributes to the tumorigenicity of BEL-7402 hepatoma cells via regulation of Survivin expression[J].Cancer Lett,2011,303(2)：92-98.

[5]Feng YB,Lin DC,Shi ZZ,et al.Overexpression of PLK1 is associated with poor survival by inhibiting apoptosis via enhancement of Survivin level in esophageal squamous cell carcinoma[J].Int J Cancer,2009,124(3)：578-588.

[6]Nassar A,Sex ton D,Cotsonis G,et al.Survivin Expression in breast carcinoma：correlation with apoptosis and prognosis[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol,2008,16(3)：221-226.

[7]Chen YB,Tu JJ,Kao J,et al.Survivin as a useful adjunct marker for the grading of papillary urothelial carcinoma[J].Arch Pathol Lab Med,2008,132(2)：224-231.

[8]Lu YH,Luo XG,Tao X.Survivin gene RNA interference induces apoptosis in human HL60 leukemia cell lines[J].Cancer Biother Radio pharm,2007,22(6)：819-825.

[9]Cheson BD,Bartlett NL,Vose JM,et al.A phaseⅡstudy of the Surviving suppressant YM155 in patients with refractory diffuse large B-cell lymphoma[J].Cancer,2011,doi：10.1002/cncr.26510.

[10]Chi YH,Haller K,Ward MD,et al.Requirements for Protein Phosphorylationand the Kinase Activity of Polo-like Kinase 1(Plk1)for the Kinetochore Function of Mitotic ArrestDefi ciency Protein 1(Mad1)[J].J Biol Chem 2008,283(3)：35834-35844.

[11]Colnaghi R,Wheatley SP.Liaisons between Survivin and Plk1 during cell division and cell death[J].J Biol Chem,2010,285(29)：22592-22604.