吴玛莉，徐莉娜，李安梅，唐莉娜，黄雨婷，檀 军，何光志

(1贵州省疾病预控控制中心，贵阳550004;2贵州大学动物学专业;3贵阳中医学院)

并殖吸虫寄生肺部引起的肺吸虫病广泛分布于亚洲、非洲及南美洲，是一种人畜共患的重要寄生虫病，我国分布的并殖吸虫优势种主要为卫氏并殖吸虫和斯氏狸殖吸虫［1］。贵州省是斯氏狸殖吸虫疫区，近年流行病学调查显示感染发病率居高不下。李安梅等2007年对2 090例寄生虫病住院病例的回顾性调查分析显示，肺吸虫病例占3.21%(67例)，仅次于蛔虫发病率，男女比例 4.151［2］;2008年贵州省医院门诊患者送检血清阳性率 为18.18%，2009年上升至22.22%，送检患者中5～14岁者占39.33% ～68.18%，且广泛分布于全省各地。肺吸虫病常用临床诊断方法主要为通过ELISA检测患者血清或胸腔积液内的抗体［3，4］，但最佳的方法应该既能用于早期感染潜伏期检测，亦能在治疗阶段准确评估药效，这就需要寻找更敏感的诊断生物标记物。Th2控制的免疫反应是蠕虫感染的一个独有特征，但不同虫种具体调控情况不尽相同［5］。2011年11月～2012年1月，我们对24例肺吸虫病患者血清IL-10、IL-6、转化生长因子(TGF)-β1水平进行了测定，旨在为今后检测试剂盒的开发提供理论基础，并进一步了解肺吸虫感染的细胞免疫调节机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料 研究对象为经珠海海泰肺吸虫抗体试剂盒诊断阳性的患者共 24例，男20例(83%)，女4例(17%);儿童12例(儿童组)，成年人12例(成年组)。其中16例有生食溪蟹的习惯;6例临床症状不明显，临床主要表现为胸水14例，有寄生虫包块症状的儿童患者4例。选择4例健康志愿者作为对照组，其一般资料与上述患者具有可比性。

1.2 血清IL-10、IL-6、TGF-β1检测 用普通生化管抽取24例患者及对照组空腹静脉血2 mL，3 000 r/min离心5 min取上清，放20℃备用。采用联科生物IL-10、IL-6、TGF-β1试剂盒进行检测，步骤如下:每孔先后加入50μL样本稀释液及50μL标准品、样本和对照品，再加入5μL检测抗体，室温孵育3 h;洗板后每孔加入100μL辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素孵育45 min;洗板后加入100μL显色底物TMB孵育10～30 min，加入100μL终止液终止反应，在酶标仪上以450 nm检测OD值。根据标准品绘制标准曲线并计算直线回归方程(r＞99%)。以各样品所测OD值结合方程计算细胞因子浓度。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0进行独立样本t检验。计量数据以¯x±s表示，先进行Levene方差齐性检验，以α=0.05作为检验水准(P＞0.05为方差齐，反之则方差不齐);随后进行均值方程的t检验，根据第一步所获P值选择相应t值及对应的P值，以P≤0.05或 P≤0.01为差异具有统计学意义。

2 结果

各组血清 IL-10、IL-6、TGF-β1 水平见图 1。Levene方差齐性检验显示，肺吸虫病患者成年组IL-10、IL-6、TGF-β1 水平方差齐(F=4.22，P=0.059;F=1.546，P=0.234;F=0.103，P=0.753)，与对照组比较结果均无显著差异(t=1.37，P ＞0.05;t=0.78，P ＞0.05;t=0.63，P ＞ 0.05);儿童组 IL-10、IL-6、TGF-β1 水平方差不齐(F=1.281，P=0.227;F=1.482，P=0.244;F=0.453，P=0.512)，其中IL-10 水平显著高于照组(t=2.94，P ＜0.05)，IL-6、TGF-β1水平与对照组比较均无显著差异(t=1.37，P ＞0.05;t=1.40，P ＞0.05)。

图 1 血清 IL-10、IL-6、TGF-β1 水平

3 讨论

对鼠类动物模型的研究表明，在肠道蠕虫感染过程中Th2免疫反应必不可少［6］，可产生 IL-4、IL-9、IL-10、IL-13、IL-5、IL-21 等［6，7］，此类反应均由 Th2极化引起［9］。产生 Th2反应对于蠕虫的寄生是最基本的条件，但平衡控制此种反应亦是必需的。这种控制由T调节(Treg)细胞完成。当前，有几种可能的机制被用来解释蠕虫感染后的抗炎症反应，包括 IL-10、TGF-β 和 IgG4 封闭抗体产生等［10，11］。寄生虫分泌结合寄主TGF-β受体的物质，可促进Treg细胞分化，这些体内抑制性的相互作用降低了感染强度［8］。感染了鼠鞭虫和人蛔虫的非洲儿童可比同地区未感染者产生更多的 IL-10和TGF-β［11］，而每隔5年对巴西贫困地区1 060例4～11岁感染上述两种寄生虫儿童血清细胞因子的检测结果显示，IL-10显著升高［12］。IL-10 由 IL-4 诱导、TGF-β 介导［13，14］，具有广泛的抗炎特性及免疫调节功能，是最初来源于Th2细胞的一个独特产物，随后发现其在各种淋巴细胞及骨髓细胞中表达［17］，并可通过抑制抗原递呈细胞功能影响T细胞功能，交叉调节Th1细胞的生长和功能。Treg细胞也分泌 IL-10［15］，故后者可能促进更多抗炎症表型的发展，并介导与这些感染相关的过敏症状的调节［12］。

食源性吸虫感染可激活典型的Th2反应:①华支睾吸虫:转基因小鼠 FVB感染后形成囊肿，刺激与Th2反应相关的细胞因子 IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、TGF-β 分泌增加［16］。②并殖吸虫:斯氏狸殖吸虫感染大鼠12周时肝组织中的IL-4增加趋势显著，肺吸虫患儿治疗后外周血血清中 IL-5显著下降［17］。③肝片吸虫:可溶性虫卵蛋白可导致 TGF-β1和IL-10升高［18］。该病发病以少年儿童为主，若要筛查出可用于人群诊断的分子标志物应该分别研究未成年和成年患者的情况，因为二者感染后引发的免疫反应可能有所不同。本研究显示，除儿童组血清IL-10水平显著高于对照组外，余肺吸虫感染患者血清IL-10、IL-6、TGF-β1水平均与对照组无显著差异。即血清IL-10水平仅在喜欢食用不熟溪蟹、且有典型包块症状的儿童肺吸虫感染患者中普遍升高。可能机制为IL-10在儿童肺吸虫感染中所起作用很可能是抗炎;TGF-β1的调控并非必需;可能有其他免疫分子通路参与了此类感染。本研究中肺吸虫感染者血清IL-6水平变化不显著，和通常的Th2反应涉及IL-6分泌不一致，且与我们前期研究在感染大鼠血清中观察到该因子显著上升不同(实验数据未发表)，提示人类和鼠类蠕虫感染的Th2反应不同。故鼠模虽已广泛用于蠕虫免疫学研究，但不可把所有在动物感染上获得的实验结论扩展至人类，如鼠类的嗜酸性细胞和人类有根本性差异，其无 IgE Fc受体表达、不会很快脱粒化［19］。以后应该更针对性地关注人类感染蠕虫后引发的免疫学变化，研究更多病例的流行病学及血清细胞因子分泌情况，以便获取更敏感特异的诊断标记物。

综上所述，对具备食蟹史的儿童肺吸虫感染患者，血清IL-10升高具有一定的潜在诊断价值。

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