杨利娟，黄君梅，王飞

雌激素是人体内一种重要的内源性物质, 在生殖、免疫、骨骼、心血管和中枢神经系统中发挥重要作用，在临床上广泛应用于预防和治疗绝经后骨质疏松症（postmenopausal osteoporosis，PMOP)。但是长期应用会导致乳腺癌和子宫内膜癌发病率上升等副作用[1]。因此，迫切需要寻求具有雌激素作用，但临床副作用更小，更为安全的药物。本研究在充分认识骨质疏松症发病机理的基础上，以中医“肾主骨”理论为指导，选取补肾中药何首乌Polygonum multiflorumThunb、骨碎补Drynaria fartunei(Kunze)J.Sm.和淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.为研究对象，拟分别评价何首乌、骨碎补和淫羊藿粗提物及其主要成分对雌激素受体ERα和ERβ的选择性激动作用，为其临床应用于骨质疏松作用机制研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 药品

何首乌(70%乙醇提取)、骨碎补（50%乙醇提取）、淫羊藿（水提取）浸膏由河北以岭制药厂提供，大黄素、大黄酸、大黄酚、二苯乙烯苷、淫羊藿苷、柚皮苷（纯度99%以上）均购自中国药品生物制品检定所。药品用DMSO溶解备用。

1.2 试剂与仪器

DMEM高糖培养液、新生小牛血清、活性炭处理去内源激素新生小牛血清、10%青链霉素液、胰酶购自成都哈里生物有限公司。DMSO购自美国Amresco公司。OPTI-MEM®I培养液购自GIBCO。17 β-Estradiol (E2)购自Sigma公司。转染试剂Liprfectamine2000购自Invitrogen公司。XDS-1B型倒置相差显微镜（COIC）；二氧化碳培养箱（美国Thermo）；Varioskan F型全波长扫描式多功能读数仪（美国Thermo）。

1.3 细胞培养

宫颈癌细胞（HeLa细胞）培养于含10%新生小牛血清、1%双抗（青霉素，链霉素）的DMEM高糖培养基中，置于培养箱中孵育，每周传代一次。

1.4 质粒

pCIneo-hERα质粒、pIRES-hERβ质粒、pGL3-5×ERE-Luc报告质粒由本实验室自行构建，pSV-βgal内参质粒购自promega公司。……