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抗人红细胞单链抗体与狂犬病毒G蛋白双功能融合蛋白的构建及生物学活性检测*

2012-06-07周松峰廖文军覃绍敏袁书智白安斌吴健敏

中国人兽共患病学报 2012年6期
关键词:血清融合检测

周松峰,廖文军,覃绍敏,袁书智,白安斌,吴健敏

狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RV)引起的中枢神经系统感染的急性人畜共患传染病。所有温血动物都可感染,狂犬病一旦发病,病死率几乎100%[1],是人类病死率最高的急性传染病之一。狂犬病病毒G基因编码的糖蛋白(glycoprotein,GP)是病毒唯一暴露在表面的蛋白[2],是唯一能刺激机体产生中和抗体的病毒蛋白[3],在狂犬病毒致病和免疫中起着关键作用[4]。

狂犬病的诊断方法目前主要有中和试验、免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)等,但这些检测方法对仪器和专业人员的依赖性较高,检测成本昂贵,且耗时相对较长,极大的限制了它们在基层单位的应用,由于我国面积辽阔,农村散养犬较多,在开展RV的监测及免疫效果评估时,急需建立一种快速、敏感、稳定,可以现场使用的检测方法。

近年来自体红细胞凝集试验发展迅速[5],已在多个检测领域得到应用[6-7]。该方法的基本原理是:以红细胞作为指示细胞,利用基因工程方法构建一种重组双功能融合蛋白(目标抗原或抗体与红细胞非凝集型抗体[8]联结而形成的抗原-抗体或抗体-抗体结合物),该融合蛋白既能与红细胞结合又能与被检抗体/抗原结合,通过样品中被检抗体/抗原的桥联作用,使指示红细胞发生凝集,根据指示红细胞的凝集现象达到快速检测的目的。

本实验室利用该技术成功建立了检测猪瘟、猪伪狂犬病毒的红细胞凝集试验[9-10]。因……

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