祝秀梅，马全英，杜 平，王 凡，吕志慧，牟克斌

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 （Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）于1987年首先出现于美国［1］，由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起。其症状主要表现为怀孕母猪流产、早产、死胎、木乃伊胎及仔猪感染后的成活率下降。PRRS的一显著特性是具有高度传染性，1987年在北美首次爆发后，迅速在全球蔓延［2－3］，给畜牧业的发展带来了严重的危害。十多年来，因它给世界养猪业造成巨大经济损失而引起了科学界的关注。2006年在我国暴发的高热病，给我国的养猪业带来巨大的破坏，由于诊断不及时，未做好应对工作，使许多中小型猪场因此倒闭，养殖户损失惨重［4－5］。因此建立快速有效实用的诊断方法是防制PRRS流行的重要环节。目前的诊断方法存在操作复杂费时、灵敏度或特异性不强等缺点。普通RT-PCR易出现假阳性，且核酸染色剂（溴化乙锭，EB）对人体健康有很大的危害。

实时荧光定量PCR（Real-time PCR）具有敏感性和特异性高、重复性和稳定

性好、耗时短、无污染的特点，已成为核酸定量检测的首选方法而得到广泛应用［6－8］。本研究选用PRRSV中的最保守的ORF7基因，设计引物和探针，建立了检测PRRSV的TaqMan实时荧光定量PCR，并对体系进行了优化。分别进行特异性、敏感性、稳定性试验，并对临床样品进行检测，建立了可准确、快速检测PRRSV的方法。

1 材 料

1.1 毒株 PRRSV SY0608细胞毒均由本实验室分离、鉴定并保存PCV-2、CSFV、HCV、PRV、PPV细胞毒均为本实验室保存；临床样品采自周边地区猪场。

1.2 试剂与仪器 病毒基因组RNA提取试剂盒购自 QIAGEN 公司，Premix ExTaqTM、T4DNA ligase、反转录试剂盒、Ex-Taq聚合酶、pMD-18T、DNA Marker等均购自TaKaRa（大连）公司；……