袁 军，许香雅，沈榕强

(福建农林大学 a.生命科学学院;b.生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福州 350002)

乳酸脱氢酶(lactate dehydmgenaLse，LDH)是糖代谢中的主要酶类，可催化生物体内丙酮酸转化为乳酸，也是肿瘤发生、发展中Warburg效应的重要效应酶。Warburg效应是指肿瘤在发生、发展过程中，能量获得方式由有氧方式转化为无氧糖酵解方式的现象。在脊椎动物体内，LDH存在3种亚基［1］，分别为A(或称M亚基)、B(或称H亚基)、C。研究表明，减少ldha基因的表达能减少细胞的转化和显著地延长肿瘤的形成时间，因此，ldha基因在肿瘤的形成初期和肿瘤的发生过程中扮演着重要角色［2－3］。ldha基因编码的LHD-A蛋白是肿瘤相关的关键调控因子HIF-1α及c-Myc的效应蛋白，它在肿瘤发生、发展中起关键作用，由于基因改变和肿瘤低氧症，许多癌细胞消耗大量的葡萄糖并且通过LDH-A生成乳酸。LDH-A表达水平的变化直接关联着肿瘤的发展程度［4］。此外，在人体内LDH-A同工酶谱的变化也可从一定程度上反映组织器官的病变，对诊断心脑血管疾病、呼吸道疾病、肝脏疾病、肿瘤等均有重要参考价值。为了得到LDH-A的纯蛋白，以便在肿瘤相关通路中进行LDH-A蛋白水平的检测，并进一步阐明ldha基因作用的分子机理，本文对Hela细胞中的LDH-A蛋白编码基因进行了克隆，并在E.coli中进行表达研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株和质粒

本实验所涉及的菌株见表1，质粒见表2。

表1 本实验所用到的菌株

表2 本实验所用到的质粒

1.1.2 主要试剂

限制性内切酶EcoR I和 HindⅢ、Taq酶、T4－DNA连接酶、卡那霉素(Kan)均购自Takara公司。质粒提取试剂盒购自北京庄盟国际生物基因科技公司。……