李建辉，左玉柱，孙彦欣，范京惠

（河北农业大学动物科技学院，河北保定 071001）

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是猪的一种高度接触性传染病，可引起母猪的生殖障碍以及仔猪严重的呼吸道疾病和高病死率［1］。本病的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV），该病毒感染具有两个主要特征，一是持续性的感染，二是免疫抑制作用［2］。PRRSV主要结构蛋白有E蛋白、M蛋白和N蛋白，其中E蛋白即GP5蛋白，由病毒ORF5基因编码。GP5蛋白是PRRSV的囊膜糖蛋白，在病毒感染宿主细胞过程中起着重要作用，同时，还能刺激机体产生中和抗体［3］。但该蛋白含有的3个疏水跨膜区使得应用多种表达系统均难以获得GP5全基因的高效表达［4］。陈军义等［5］曾去除了 N末端的信号肽部分，扩增了GP5全基因中79bp～600 bp的基因片段，并成功地表达了GP5蛋白。Oleksiewicz M B等［6］从噬菌体12肽库中鉴定出一个高度保守的中和表位，即B表位。此外，在位于B表位的7个氨基酸之前，还有一高变异性的免疫优势区域称为A表位，该表位在感染后快速产生非中和抗体。这些特征使得A表位可能成为诱骗表位，从而减少针对邻近NE的保护性反应。顾小雪等［7］扩增了只包括A表位和B表位的一段小肽的基因片段，虽然成功表达，但并不能产生中和抗体。因此，为了获得含有中和活性的PRRSV－GP5蛋白，本研究根据PRRSV－GP5蛋白的结构特点，扩增去除信号肽及A表位的GP5基因获得dGP5，并对表达的PRRSV－dGP5融合蛋白进行SDS－PAGE和 Western blot分析，以期为深入研究PRRSV GP5蛋白的结构和功能奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

pGEX－6p－1载体和猪PRRS阳性血清均由河北农业大学动物科技学院微生物实验室保存；……