杨依霏，罗青平，张蓉蓉，艾地云，廖永洪，邵华斌＊，程国富＊

（1.华中农业大学动物医学院动物病理实验室，湖北武汉430070；2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，湖北武汉430064）

鸭疫里氏杆菌（Riemerellaanatipestifer，RA）是一种隶属于黄杆菌科，无运动性、不形成芽胞的革兰阴性菌。该菌可引起鸭、火鸡以及其他水禽的疾病，即鸭疫里氏杆菌病或传染性浆膜炎［1］，可以引起雏鸭的大量死亡，给养鸭业带来了巨大的经济损失。RA的血清型复杂，目前公认的有21种［2］，给本病的免疫预防和诊断带来极大困难。虽然国内外已经先后报道了检测RA血清抗体的玻板凝集试验、琼脂扩散试验以及间接免疫荧光抗体检测等方法。但也存在灵敏度低、操作步骤繁琐、检测设备昂贵等缺点。ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，是目前应用广泛的检测方法之一。外膜蛋白（omp）是革兰阴性菌特有的一种结构蛋白，具有良好的免疫原性，是亚单位疫苗的候选组成部分，成为目前的研究热点。本研究中选取RA的外膜蛋白ompA基因进行克隆和原核表达，建立以重组ompA蛋白为包被抗原，检测RA血清抗体的间接ELISA方法。

1 材料与方法

1.1 材料

原核表达载体pET－28a（＋），感受态细胞E.coliBL21－DE3，1型鸭疫里氏杆菌菌株由湖北省农科院畜牧兽医所保存。TransTaq－T、dNTPs、DNA标准DL 2 000、DNA标准DL15 000购自北京全式金公司；限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ，T4连接酶购自宝生物工程（大连）有限公司；低分子质量标准蛋白Marker购自于Fermentas公司；凝胶回收试剂盒、质粒小量提取试剂盒购自于北京索莱宝科技有限公司；细菌基因组提取试剂盒购自于北京天根生物科技公司；……