张笑添， 任海兰 (山西医科大学汾阳学院生物化学教研室， 汾阳 0300;山西省汾阳医院肾内科)

慢性HBV感染是严重威胁我国人民健康的疾病之一，近年来研究发现，机体接触HBV后，细胞因子在宿主清除病毒的免疫应答中发挥了重要作用，但同时也可导致感染肝细胞的损伤［1］。为了进一步了解慢性HBV感染的病因及发病机制，我们检测了60例慢性HBV感染者和60例健康人群的IL-8－251A/T基因多态性，并测定其血清IL-8水平，以探讨IL-8基因多态性对血清IL-8水平的影响及其与慢性HBV感染的关系。

1 对象方法

1.1 对象 选择2009－10～2010－05山西省汾阳医院就诊的慢性HBV感染者60例，其中男32例，女28例，年龄(41.47±13.32)岁。临床诊断均符合2005年中华医学会肝病与感染病学分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》诊断标准［2］。同时选择健康人群60例作为对照组，其中男26例，女14例，年龄(41.65±13.09)岁。本研究已通过医院伦理委员会批准。患者也已经知情同意。

1.2 方法

1.2.1 血清IL-8水平测定 采用ELISA试剂盒(上海森雄科技实业有限公司)检测所有标本血清中IL-8的水平，实验步骤严格按照试剂盒说明操作。

1.2.2 IL-8基因多态性检测 ①抽取研究对象空腹静脉血3－5 ml，用血液基因组DNA提取试剂盒(北京天根生物技术公司)抽提DNA，－20℃冻存待检。②使用Primer 5.0软件设计，上游引物:5'－AATGCCTTGCTCCAACTGC－3';下游引物:5'－AAGCTTGTGTGCTCTGCTGTCTCT－3'(上海生工生物技术有限公司合成)。③PCR扩增体系为25 μl，其中模板 DNA 2 μl，上下游引物各 20 pmol，2 × Taq PCR MasterMix 12.5 μl(北京天根生物技术公司)其余用水补足。扩增条件为:95℃预变性5 min;95℃30 s、55 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s，30 次循环;最后72 ℃延伸8 min。④PCR酶切产物分析，取PCR扩增产物10 μl，限制性内切酶MunⅠ(大连宝生物公司)10 U，0.1%BSA Buffer 2 μl，10 × M buffer 2 μl，其余用水补足，混匀后置37℃酶切过夜。……