杨宝友，李仲兴，秦金喜

（1.河北省玉田县医院检验科，河北玉田 064100；2.河北医科大学第二医院检验科，河北石家庄 050000；3.河北省徐水县人民医院检验科，河北徐水 072550）

铜绿假单胞菌抗菌物质对白色念珠菌的体外抑菌活性研究

杨宝友1，李仲兴2*，秦金喜3

（1.河北省玉田县医院检验科，河北玉田 064100；2.河北医科大学第二医院检验科，河北石家庄 050000；3.河北省徐水县人民医院检验科，河北徐水 072550）

目的观察铜绿假单胞菌抗菌物质对白色念珠菌的体外抑菌活性。方法用交叉条带实验方法测定铜绿假单胞菌对18株白色念珠菌等的体外抑制活性。结果铜绿假单胞菌抗菌物质对白色念珠菌体外抑菌活性良好，第6和8株铜绿假单胞菌对白色念珠菌的抑制率均达到了100%，铜绿假单胞菌产生色素的菌株抗真菌活性显著优于不产色素的菌株。铜绿假单胞菌抑制白色念珠菌的生长，主要是铜绿假单胞菌产生的绿脓素。结论铜绿假单胞菌产生的抗菌物质对白色念珠菌具有较强的抗真菌活性。

假单胞菌，铜绿；念珠菌，白色；抑菌活性

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是临床上引起人类多种感染的重要致病菌，同时，它产生的抗菌物质，还具有抑制其他细菌的能力［1］，白色念珠菌是最常见的致病性真菌，深部真菌感染以白色念珠菌（又称白色假丝酵母）居多，占76.40%［2］，所引起的肺部感染其治疗也很困难。铜绿假单胞菌对临床分离的白色念珠菌是否有抑制作用，国内尚无报告。为此，我们随机选取10株铜绿假单胞菌，分别对18株白色念珠菌进行了体外抑菌实验，结果较为满意，报告如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源与鉴定：10株铜绿假单胞菌为我院临床标本，主要来自于痰标本，18株白色念珠菌等从阴道分泌物、痰和血液等标本分离而来。两种细菌均按临床微生物学手册等进行鉴定［3-4］。

1.2 培养基：Mue11er-Hinton琼脂（M-H琼脂），英国 OXOID 公司生产，批号 992952。沙堡（sabouraud）培养基，北京陆桥有限公司生产，批号110324。

1.3 菌液制备：将铜绿假单胞菌接种于M-H琼脂上，将各指示念珠菌接种于沙堡琼脂培养基上，35℃均培养18～24h，分别取其菌落用M-H肉汤和沙堡肉汤制成约为108cfu/mL的菌悬液。

1.4 实验方法：将铜绿假单胞菌悬液划线接种于沙氏琼脂平板中央，使其呈一条宽为6mm的接种线，35℃培养24h后，在接种线上生长的菌落呈现一条菌落条带，用无菌玻片轻轻刮去条带上生长的菌苔，将平皿倒置，平皿盖内放一直径为5cm的浸氯仿滤纸片（用于杀死残存的铜绿假单胞菌），35℃置15min，打开平皿取出氯仿滤纸片，待平皿内氯仿挥发完毕后，分别将白色念珠菌的菌悬液，于原铜绿假单胞菌生长条带呈垂直交叉划线接种，35℃培养24h后观察结果。

1.5 结果判读：在原铜绿假单胞菌生长带上，被测菌仍沿划线生长，无抑菌带出现为耐药（阴性），出现6 mm及以上的抑菌带为敏感（阳性）。

2 结 果

10株铜绿假单胞菌对18株白色念珠菌共进行了180次体外抑菌实验，结果是敏感95次，耐药85次，抑菌率52.28%，平均抑菌带宽度28.44mm。

2.1 铜绿假单胞菌对白色念珠菌的抑菌情况：5、6和8号铜绿假单胞菌的抑菌活性最强，抑菌率达94%～100%。但1、7和10号菌株几乎无抑菌效果。说明铜绿假单胞菌的不同菌株对白色念珠菌的抑菌效果也不同。被铜绿假单胞菌抗菌物质所抑制的抑菌带很宽，几乎占了整个平板（直径90mm）的一半；说明铜绿假单胞菌对白色念珠菌的抑菌活性很强，见表1，图1。

表1 铜绿假单胞菌对18株白色念珠菌敏感菌株的体外抑菌活性Table 1 In vitro inhibitory activity of antimicrobial substance of P.aeruginosa against Candida.albicans

图1 铜绿假单胞菌产生的抗菌物质对白色念珠菌的抑菌作用，两边各4条带为白色念珠菌的菌落，当中空白处为抑制区（白色念珠菌不能生长）

Figure 1 Bacteriostatic action of Pseudomonas.aeruginosa by producing antimicrobia1 substances against C.a1bicans.Four be1ts on each side was Candida.a1bicans co1onies，and the midd1e b1ank was the zone of inhibition（Candida.a1bicans can not grow）

2.2 铜绿假单胞菌色素与抗菌作用：10株铜绿假单胞菌也因产色素不同，其抑菌效果也不一样，产色素的菌株抑菌效果较好，不产色素的菌株抑菌效果较差，同时，产色素的菌株对不同念珠菌的抑菌效果也不一样，6号和8号铜绿假单胞菌对白色念珠菌的抑菌率为100%，而平均抑菌带最宽的是6号和9号菌株，见表2。

表2 产不同色素的10株铜绿假单胞菌对18株念珠菌的抑菌情况Table 2 Inhibition activity of 10 strains pigmented Pseudomonas.aeruginosa to 18 strains of Candida.albicans

3 讨 论

念珠菌是人类的重要致病菌，目前深部念珠菌感染率在逐渐增高［5］，而白色念珠菌感染占第1位。2011年，Isibor等［6］报道在74份阴道标本培养中，共分离出致病菌84株，其中主要致病菌是白色念珠菌，共分离出35株，占47.7%；从孕妇分离出45株致病菌，其中白色念珠菌23株（51.1%）；从非孕妇分离出致病菌39株，白色念珠菌12株（30.8%）。2008年哥伦比亚的波哥大（Bogotá）三级保健中心用于静脉给药的塑料容器被念珠菌污染，发生18例白色念珠菌血流感染的暴发流行［7］。

铜绿假单胞菌对其他细菌有抑菌作用［1］。因此，我们利用临床分离的10株铜绿假单胞菌对临床分离的18株白色念珠菌进行了大批量抗菌活性研究，发现大多数铜绿假单胞菌对白色念珠菌的抗菌效果较好，通过180次试验，敏感95次，抑菌率52.28%；对白色念珠菌的抑菌带宽度最宽的可达44mm，抑菌带几乎占了平板（90mm）的一半，同时发现铜绿假单胞菌产色素的菌株抗菌效果好，不产色素的菌株抑菌效果较差。如产色素的5、6、8号菌株抑菌率达90%以上，甚至100%。

北爱尔兰学者Kerr等［8］利用铜绿假单胞菌对白色念珠菌、热带念珠菌等各1株进行抑菌实验，发现对白色念珠菌抗菌效果最好，但因菌株太少（仅1株），菌株之间又有差异，故不好说明抑菌效果。Bandara等［9］报道铜绿假单胞菌体外可抑制念珠菌的生物膜的形成，铜绿假单胞菌对细菌的抑制作用，主要是其产生绿脓素（pyocyanin）。绿脓素对细菌的抑制作用，主要是杀死细菌，绿脓素杀菌可能存在氧化或还原2种形式，后者是不稳定的与分子氧快速氧化的自由基，这种自身氧化作用导致超氧化物、过氧化氢形成，或在金属催化剂（如铁）存在下形成羟基原子团［hydroxy1 radica1（HOˊ）］而杀死敏感的细菌［10］。

Brand等［11］发现铜绿假单胞菌可以杀死白色念珠菌的菌丝，而不能杀死酵母细胞，杀死菌丝涉及直接接触和可溶性因子（so1ub1e factors）介导2种调控模式，首先是铜绿假单胞菌黏附在活的白色念珠菌的菌丝上，第二步是定植（co1onization），定植后，铜绿假单胞菌产生不耐热的可溶性因子，使菌丝的局部细胞壁溶解，内容物流出而菌丝死亡。

铜绿假单胞菌是引起人类烧伤感染、尿路感染、各种手术切口感染，以及器械相关性医院感染的重要致病菌，甚至引起医院感染的暴发流行［12-13］。铜绿假单胞菌不仅是人类的致病菌，引起人类的各种感染，另一方面，它产生的抗菌物质又能抑制其他致病菌生长。

总之，铜绿假单胞菌对白色念珠菌有很强的抑制作用，无疑为白色念珠菌等真菌感染的抗菌药物研制开辟了一条新的途径，将对人类的健康事业作出巨大贡献。

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（本文编辑：赵丽洁）

STUDY OF IN VITRO INHIBITORY ACTIVITY OF ANTIMICROBIAL SUBSTANCE OF PSEUDOMONAS AERUGINOSA AGAINST Candida ALBICANS

YANG Baoyou1，LI Zhongxing2*，QIN Jinxi3
（1.Department of Clinical Labolatort，the Hospital of Yutian Countt，Hebei Province，Yutian 064100，China；2.Department of Clinical Laboratort，the Second Hospital of Hebei Medical Universitt，Shijiazhuang 050000，China；3.Department
of Clinical Labolatort，the People's Hospital of Xushui Countt，Hebei Province，Xushui 072550，China）

Objective To observe in vitro inhibitory activity of antibacteria1 materia1 of Pseudomonas aeruginosa against Candida.a1bicans.MethodsThe in vitro inhibitory activity of antibacteria1 materia1 of Pseudomonas aeruginosa against 18 strains C andida.a1bicans，was detected by using the cross-streak assay.ResultsThe in vitro inhibitory activity of antibacteria1 materia1 of Pseudomonas aeruginosa against Candida.a1bicans，was exce11ent，and the inhibition rate of No.6，and 8 of Pseudomonas.aeruginosas against Candida.a1bican was 100%，the pigmented strains were found to have stronger antifunga1 activity than the unpigmented strains.Pseudomonas aeruginosa inhibited the growth of Candida.a1bicans main1y by producing pyocyanin.ConclusionAntimicrobia1 substances of Pseudomonas aeruginosa against Candida.a1bicans has strong antifunga1 activity.

pseudomonas aeruginosa；candida a1bicans；inhibitory activity

R738.991

A

1007-3205（2012）04-0425-04

2011-12-10；

2012-02-13

杨宝友（1968-），男，河北省玉田县医院副主任检验师，医学学士，从事临床细菌学研究。

*通讯作者。E-mai1：1zx_135@163.com

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.04.019