唐哲明 梁国荣（广西医科大学第四附属医院（柳州市工人医院）整形外科，广西 柳州 545005）

葛根素系从豆科植物野葛或甘葛藤根中提取的一种黄酮苷。其化学名称为：8－β－D－葡萄吡喃糖－4’，7－二羟基异黄酮。有扩张冠状动脉和脑血管、降低心肌耗氧量，改善微循环和抗血小板聚集的作用［1－3］。已有研究表明，葛根素有促进内皮细胞增殖作用［4－9］，本研究以体外培养人脐静脉内皮细胞HUVEC为模型，研究葛根素对HUVEC细胞增殖及凋亡的影响，并测定p－ERK1／2蛋白的表达，初步探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂

葛根素（HPLC＞98%）购于上海经科化学科技有限公司；四甲基噻唑兰 （MTT）购于Invitrogen公司；磷酸化ERK1／2抗体及辣根过氧化酶标记二抗均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 细胞

人脐静脉内皮细胞株（HUVEC－12）培养于含10%胎牛血清、100U·ml－1青霉素和100μg·ml－1链霉素的DMEM培养液中，置于37℃，5%CO2培养箱中培养。

1.3 方法

1.3.1 MTT法检测细胞活性

取对数生长期HUVEC－12细胞经胰酶消化后，以2×104·孔－1的细胞密度接种于96孔板，每孔100μl。继续培养24h待细胞完全贴壁后，移去上层培养液，加入含不同浓度葛根素（1、5、10、20、40、80、160μM）的新鲜培养基。空白对照组只加入培养基。继续培养48h后，每孔加入MTT溶液（5mg·ml－1）20μl，孵育4h，吸去上清液，每孔加 DMSO 150 μl，避光振荡10min，在全自动酶标仪上于490nm波长检测各孔吸光度（OD）值。细胞增殖率＝处理组OD值／对照组OD值×100%。

1.3.2 流式细胞术

收集对数生长期细胞，调整细胞浓度，以每孔1×106个细胞接种到6孔板中。24h后，加入不同浓度葛根素（20、40、80 μM）及空白培养基，继续培养48h后，胰蛋白酶消化收集各组细胞，1000rpm·min－1离心5min，加预冷的PBS洗涤2次后，Annexin V－FITC及碘化丙啶（PI，50μg·ml－1）室温避光染色，15min后，用流式细胞仪检测细胞凋亡。……