T LR 2、4/M yD 88通路相关分子mRNA在急性结肠炎小鼠结肠组织中的表达及意义
2012-05-06刘丽琼廖鑫凯
刘丽琼,聂 奎*,余 姣,廖鑫凯
(1.西南大学动物科技学院,重庆 400715;2.广安区畜牧食品局,四川 广安 638000)
炎症是机体的一种非特异性防御和消灭病原微生物的积极方式,属于固有免疫的一种特殊形式,同时也是一个病理过程。但当机体免疫功能出现紊乱时,各种免疫细胞将分泌超量促炎细胞因子,产生“细胞因子风暴”而导致动物死亡,易造成脑炎、肺炎、肠炎等全身各个器官的炎症反应,最终导致动物死亡。因此,了解炎症发生的分子机制对研发新的抗炎中(兽)药以及有效防治动物炎性疾病都具有重要意义。研究表明,在机体发生炎性反应的固有免疫反应应答中,Toll样受体(TLRs)扮演着重要角色。TLRs识别外源性配体或内源性分子后,将识别信号传递给MyD88接头蛋白,MyD88再将该信号传递给核因子-кB(NF-кB)并引起NF-кB活化,进而诱导炎症因子的表达来参与炎症反应[1]。但在炎症反应过程中TLRs/MyD88通路相关分子的关系尚不清楚。本试验采用Real-time RT-PCR方法研究TLR2、TLR4及其下游MyD88依赖的免疫信号通路的关键分子在小鼠感染急性结肠炎前后多个时段结肠组织中的转录水平,旨在了解固有免疫分子在炎症中的作用及抗炎机制,为研发新型抗炎中药提供参考。
1 试验材料
1.1 试验动物
6~7周龄的SPF级昆明小鼠30只,购于重庆医科大学实验动物中心(许可证编号为SCXK渝2007-0002),雌雄各半,体重为25±2 g,试验组24只,对照组6只。
1.2 主要试剂及仪器
2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)购自 Sigma公司;RNAiso Plus、PrimeScriptTMRT reagent Kit、Ex Taq DNA聚合酶、SYBR®Primix Ex TaqTMⅡ均购自TaKaRa公司。Mini Opticon Real Time PCR仪由美国Bio-Rad公司生产。
