王少斌 程水源 王燕 许锋 姜德志 陈慧娟 李琳玲 程华

摘要：分别采用十六烷基三乙基溴化铵（ＣＴＡＢ）法和十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ）法提取板栗（Ｃａｓｔａｎｅａ ｍｏｌｌｉｓｓｉｍａ ＢＬ．）基因组ＤＮＡ，取适量ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳，并利用紫外可见分光光度计测定所提取的ＤＮＡ在２６０和２８０ ｎｍ的吸光度及其比值，利用Ｅｃｏ ＲⅠ和ＭｓｅⅠ双酶切后进行随机扩增长度多态性（ＡＦＬＰ）分析。结果表明，两种方法均能从板栗中提取出一定质量的、比较完整的、纯度比较高的ＤＮＡ，ＳＤＳ法提取的板栗ＤＮＡ的纯度更高、质量更好。

关键词：板栗（Ｃａｓｔａｎｅａ ｍｏｌｌｉｓｓｉｍａ ＢＬ．）；DNA提取；十六烷基三乙基溴化铵（ＣＴＡＢ）法；十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ）法；随机扩增长度多态性（ＡＦＬＰ）

中图分类号：Ｑ５０３文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）14－3101-03

Comparison of CTAB and SDS Methods for DNA Extracion of Chestnut

ＷＡＮＧ Ｓｈａｏ－ｂｉｎ１，ＣＨＥＮＧ Ｓｈｕｉ－ｙｕａｎ２，３，ＷＡＮＧ Ｙａｎ２，ＸＵ Ｆｅｎｇ１，ＪＩＡＮＧ Ｄｅ－ｚｈｉ１，２，ＣＨＥＮ Ｈｕｉ－ｊｕａｎ１，

ＬＩ Ｌｉｎ-ｌｉｎｇ２，３，ＣＨＥＮＧ Ｈｕａ２，３

（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｇａｒｄｅｎｉｎｇ， Ｙａｎｇｔｚｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｊｉｎｇｚｈｏｕ ４３４０２５， Ｈｕｂｅｉ， Ｃｈｉｎａ；

２． Ｈｕｂｅｉ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ of Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｆｏｒｅｓｔ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ａｎｄ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ， Ｈｕａｎｇｇａｎｇ ４３８０００， Ｈｕｂｅｉ， Ｃｈｉｎａ； ３． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｈｕａｎｇｇａｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈｕａｎｇｇａｎｇ ４３８０００， Ｈｕｂｅｉ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｏｆ ｃｈｅｓｔｎｕｔ（Ｃａｓｔａｎｅａ ｍｏｌｌｉｓｓｉｍａ ＢＬ．） ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ＣＴＡＢ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ＳＤＳ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ａｎｄ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ， ａｎｄ ｔｈｅｎ ｄｏｕｂｌｅ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｂｙ ＥｃｏＲⅠ ａｎｄ ＭｓｅⅠ ｆｏｒ ＡＦＬＰ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｂｏｔｈ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗａｓ ｗｉｔｈ ｇｏｏｄ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｐｕｒｉｔｙ ｗｈｉｌｅ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ＳＤＳ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ with ｈｉｇｈｅｒ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｕｒｉｔｙ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ＣＴＡＢ ｍｅｔｈｏｄ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｃａｓｔａｎｅａ ｍｏｌｌｏｓｓｉｍａ ＢＬ．； DNA extraction； ＣＴＡＢ ｍｅｔｈｏｄ； ＳＤＳ ｍｅｔｈｏｄ； ＡＦＬＰ

板栗（Ｃａｓｔａｎｅａ ｍｏｌｌｉｓｓｉｍａ ＢＬ．）是壳斗科栗属落叶乔木，是一种重要的园艺作物，其经济栽培价值高［1］。迄今为止，人们对板栗的研究很多，但多集中于板栗的种植、病虫害防治及板栗壳的利用等方面，而对板栗基因组ＤＮＡ的研究相对较少。基因组ＤＮＡ的提取及ＤＮＡ分子标记的应用是构建基因文库和遗传图库等分子生物学研究的基础［２－４］。由于板栗富含酚类、糖类、脂肪、色素以及单宁等次生代谢物，给获得板栗基因组ＤＮＡ带来了较大困难，提取高质量ＤＮＡ更加不易。此外，传统方法提取的ＤＮＡ得率低、纯度低，难以进行酶切及ＰＣＲ扩增，进而影响随机扩增长度多态性（ＡＦＬＰ）等技术在板栗上的应用。采用十六烷基三乙基溴化铵（ＣＴＡＢ）法和十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ）法分离板栗基因组ＤＮＡ，通过比较这两种方法提取的ＤＮＡ的质量，以期优化板栗高质量ＤＮＡ模板提取的方法，旨在为板栗的分子水平研究打下基础。……