张鸿

[摘要] 目的 探讨AKIP1、PKA在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与预后的关系。 方法 选择72份卵巢癌组织标本，采用免疫组化法检测AKIP1、PKA蛋白在卵巢癌组织的表达情况，同时选择30份正常卵巢癌组织进行对照。并对患者进行随访，分析AKIP1、PKA的表达与患者预后的相关关系。 结果 上皮性卵巢癌组织AKIP1、PKA表达阳性率低于正常卵巢组织，不同TNM分期及病理分化程度上皮性卵巢癌组织AKIP1、PKA的表达阳性率存在显著差异（P ＜ 0.05），AKIP1、PKA阳性表达的卵巢癌患者两年生存率高于AKIP1、PKA阴性表达患者。 结论 AKIP1、PKA的表达缺失与上皮性卵巢癌的发生发展有关，并且能够对预后进行评估。

[关键词] 上皮性卵巢癌；AKIP1；PKA；肿瘤分期；分化；预后

[中图分类号] R737.31[文献标识码] B[文章编号] 1673-9701（2012）16-0031-03

Expression and clinical significance of AKIP1 and PKA in epithelial ovarian cancer

ZHANG Hong

Department of Obstetrics and Gynaecology, Staff-worker Hospital of Hangzhou Iron and Steel Group Company, Hangzhou 310022, China

[Abstract] Objective To investigate the expression of AKIP1 and PKA in epithelial ovarian cancer and correlation with prognosis. Methods 72 cases tissue specimen of epithelial ovarian cancer were selected and stained with immunohistochemistry to detect the expression of AKIP1 and PKA, and 30 cases tissue specimen of normal ovary were selected as control groups, and all patients were follow-up visited, correlation between expression of with AKIP1 and PKA with prognosis were analyzed. Results Expressive positive rate of AKIP1 and PKA was lower in epithelial ovarian cancer than in normal ovary, expressive positive rate of AKIP1 and PKA was discrepant in different TNM stage and differentiation of epithelial ovarian cancer, survival rate in two years was higher in patients with positive expression of AKIP1 and PKA than in patients with negative expression of AKIP1 and PKA. Conclusion Expression deletion of AKIP1 and PKA was correlative with genesis and progression of epithelial ovarian cancer, and could appraisal to prognosis.

[Key words] Epithelial ovarian cancer; AKIP1; PKA; Tumor stage; Differentiation; Prognosis

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤，卵巢癌的恶性程度高，极富侵袭力，早期诊断十分困难，预后差，临床治疗多难以取得满意的效果。卵巢癌的发生与细胞的异常增殖及凋亡机制的失调有关[1]，在恶性肿瘤发生时，与肿瘤相关的标志性细胞因子多表达异常，并能够为肿瘤的定性诊断提供具有价值的线索。AKIP1、PKA是近年研究发现的与细胞周期调控密切相关的细胞因子，本文就其在上皮性卵巢癌的表达及其价值进行研究，为卵巢癌的诊断及预后评估提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择我院2007年1月～2009年1月手术切除的上皮性卵巢癌组织标本72份，患者年龄36～71岁，平均（47.0±11.6）岁；患者肿瘤TNM分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期29例，Ⅲ期27例。选择同期手术切除的正常卵巢组织标本30例作为对照组，患者年龄35～69岁，平均（48.0±13.4）岁，排除合并其他器官系统恶性肿瘤患者、术前接受放射治疗或化疗患者、合并免疫系统及内分泌系统肿瘤患者。所有患者均具有完整的随访资料。两组间患者年龄无显著差异（P ＞ 0.05），具有可比性。

1.2 主要仪器及试剂

M330792型切片机（北京中西远大科技有限公司），CX21型显微镜（日本奥林巴斯公司），JWL型微波修复仪、HH-601型恒温水浴箱（常州普森电子仪器厂），鼠抗人AKIP1单克隆抗体、鼠抗人PKA单克隆抗体（美国AU公司）、PBS缓冲液、枸橼酸缓冲液、固定液等试剂由本院病理科提供。

1.3 AKIP1、PKA蛋白检测方法

组织标本免疫组化染色采用SP法，组织标本切除后常规固定、石蜡包埋，2 μm厚度连续切片，脱蜡水化，枸橼酸溶液浸泡，微波修复暴露抗原，PBS缓冲液冲洗，滴加过氧化氢溶液消除内源性过氧化氢酶活性，PBS缓冲液冲洗，滴加工作浓度一抗，低温孵育过夜后PBS缓冲液冲洗，滴加二抗，充分反应后滴加反应终止液终止反应，采用DAB显色，苏木素染色返兰，酒精固定、二甲苯透明，中性树胶封片。

1.4 切片观察及评价

组织标本评价采用积分法，参照有关文献观察组织染色程度[2]。AKIP1、PKA蛋白阳性染色表现为在淡蓝色背景下棕黄色或者棕褐色颗粒状染色，染色强度积分采用400倍光镜下选择5个不重叠的视野，计数细胞总数及核阳性细胞数，按阳性细胞所占的百分比计分：阳性细胞率1%～25%计1分；26%～50%计2分；51%～80%计3分；＞80%计4分。染色强弱程度计分：不着色计0分；着色弱计1分；中等着色计2分；胞浆强阳或者胞核着色计3分。根据两者的乘积判断结果：0分为阴性（-，无表达）；1～3分为弱阳性（+，低度表达）；4～6分为中度阳性（++，中度表达）；8～12分为强阳性（+++，高度表达）。

1.5 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计数资料采用χ2检验，采用Log-Rank检验比较生存曲线的差异，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 上皮性卵巢癌组织AKIP1、PKA蛋白表达情况

上皮性卵巢癌组织及正常卵巢组织均有AKIP1、PKA蛋白表达，AKIP1在正常卵巢组织及卵巢癌组织阳性染色表现为细胞核棕黄色或淡黄色颗粒样染色；PKA在正常卵巢组织及卵巢癌组织阳性染色表现为细胞核及细胞膜的棕黄色及淡黄色颗粒样染色。在上皮性卵巢癌组织，AKIP1、PKA蛋白的表达阳性率低于正常卵巢组织，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1、图1~4。

2.2 上皮性卵巢癌组织AKIP1、PKA蛋白表达与临床及病理特征的关系

在上皮性卵巢癌组织，不同组织分化程度及不同TNM分期的卵巢癌组织中AKIP1、PKA蛋白的表达阳性率不同，差异存在明显统计学意义（P < 0.05）。见表2。

2.3 上皮性卵巢癌组织AKIP1、PKA蛋白表达与预后的关系

AKIP1阳性患者平均生存时间21.400个月，AKIP1阴性患者平均生存时间12.300个月，Log-Rank检验显示，AKIP1阳性患者生存时间高于AKIP1阴性患者，差异有统计学意义（χ2=4.29，P = 0.028）；PKA阳性患者平均生存期20.333个月，PKA阴性患者平均生存时间12.300个月，Log-Rank检验显示，PKA阳性患者平均生存时间高于PKA阴性患者，差异有统计学意义（χ2=4.17，P = 0.040）。生存曲线显示，AKIP1及PKA阳性上皮性卵巢癌患者生存曲线明显右移。见图5、6。

3 讨论

卵巢癌是常见的女性生殖系统恶性肿瘤，临床诊断多为中晚期，预后极差，临床病死率高，是威胁女性生命健康的主要恶性肿瘤之一。卵巢癌的发生、发展同其他器官、系统恶性肿瘤的机制相似，细胞凋亡及增殖失平衡导致的细胞异常分裂、增殖是其主要的发病原因，其中与肿瘤发生密切相关的细胞因子多是细胞增殖及凋亡密切相关的蛋白或基因片段，在细胞增殖、凋亡或相关信号转导的过程中执行关键的功能，当其表达失常时，能够引起细胞的异常增殖，如P53、n23等。

AKIP1、PKA是近年来发现的与细胞增殖及凋亡密切相关的细胞因子。AKIP1是在真核细胞广泛表达的蛋白质，是具有催化功能的酶类调节亚基，定位在细胞核上，AKIP1的编码基因是高度的保守的序列，在AKIP1编码基因的第5、6位的外显子位置，能够对连接的蛋白及酶类进行磷酸化，实现对其他蛋白功能的调节[3]。PKA属于AKAPs蛋白家族，是在人体内作为最为广泛的酶类之一，PKA蛋白的肽链C端是具有催化功能的亚基，其编码基因是高度保守的序列，该区域通过氨基酸残基的变化引起空间构象及功能的变化，AKIP1作为一个蛋白启动序列引起PKA的氨基末端的A螺旋结构的形成，引起构象变化[4]，对PKA的功能进行调节，引起其对细胞核转录因子NF-κB的调节作用，NF-κB包括5个蛋白亚基，其中p65与p50组成的异二聚体是最常见的组合形式，近年来的研究结果显示，AKIP1能连接到NF-κB的p65亚基，同PKA形成PKAc/AKIP1/p65复合体，调节p65进入细胞核的速率，抑制NF-κB的转录活性[5]，从而引起细胞的增殖活性降低。在研究中发现，在上皮性卵巢癌组织中，AKIP1、PKA的表达不同程度缺失，而且在不同TNM分期及分化程度的卵巢癌组织中，AKIP1、PKA的表达阳性率存在明显的差异，提示其低表达引起的细胞核基因转录异常可能是导致细胞异常增殖、癌变的原因之一。在体外的肿瘤细胞培养中也证实[6，7]，AKIP1表达降低，抑制NF-κB的p65亚基和PKA的相互作用，是宫颈癌、乳腺癌细胞异常增殖的原因之一。

进一步的研究发现，在卵巢癌组织AKIP1、PKA不同表达的患者，其预后表现出明显的差异，AKIP1、PKA阳性表达的患者，其生存期明显长于阴性表达患者，生存曲线右移，提示AKIP1、PKA低表达的卵巢癌组织恶性程度更高，其表达情况能够初步反映肿瘤的生物学行为特征和恶性程度，提示对切除的卵巢癌标本进行AKIP1及PKA的检测能够为预后评估提供有价值的依据。

[参考文献]

[1]王敏，刘凤英，刘建建. YKL-40在上皮性卵巢癌患者血清和组织中的表达及意义[J]. 实用医学杂志，2011，27（19）：3537-3539.

[2]Leo C，Horn LC，Rauscher C，et al. Expression of erythropoietin and erythropoietin receptor in cervical cancer and relationship to survival，hypoxia and apoptosis[J]. Clin Cancer Res，2006，12（23）：6894-6900.

[3]Nan Gao，Yurina Hibi，Marni Cueno，et al. A-kinase-interacting protein 1（AKIP1） acts as a molecular determinant of PKA in NF-κB signaling[J].J Biol Chem，2010，285（36）：8097-8104.

[4]高维娟，许顺江，丛斌，等. CCK-8抑制LPS作用下大鼠肺间质巨噬细胞NF-κB活性的cAMP-PKA通路研究[J]. 中国病理生理杂志，2006，22（10）：1891-1895.

[5]Charles C，King，Mira S，et al. Philip chang the rate of NF-kB nuclear translocation is regulated by PKA and a kinase interacting protein 1[J]. Plos One，2011，6（4）：1-15.

[6]Gao Fei，Cheng Jinke，Tong Shi，et al. Neddylation of a breast cancer-associated protein recruits a class III histone deacetylase that represses NFκB-dependent transcription[J]. NCB，2006，8（10）：1173-1176.

[7]Specht K，Haralambieva E，Bink K，et al. Different mechanisms of cyclin D1 overexpression in multiple myeloma revealed by fluorescence in situ hybridization and quantitative analysis of mRNA levels[J]. Blood，2004，104（4）：1120-1126.

（收稿日期：2011-12-22）