董进浪　谭炜炜

[摘要] 目的 探讨胃癌患者外周血中CD3+CD4-CD8-（DNT）细胞及T淋巴细胞亚群的表达及临床意义。 方法 利用流式细胞仪对43例胃癌、36例健康人外周血中的DNT细胞及T细胞亚群进行检测，并对比分析两者的差异。 结果 胃癌患者DNT细胞百分比（9.11±5.56）%明显高于正常对照组（4.84±1.43）%（P ＜ 0.01），胃癌患者CD4+%、CD4+/CD8+比值低于正常对照组（P均＜ 0.01），CD8+%高于正常对照组（P ＜ 0.01）。 结论 胃癌患者DNT细胞百分比显著升高及T淋巴细胞亚群比例改变，提示胃癌患者免疫功能异常，为胃癌发病机制研究及免疫治疗提供理论依据。

[关键词] 胃癌；DNT细胞；T淋巴细胞亚群

[中图分类号] R735.2[文献标识码] B[文章编号] 1673-9701（2012）21-0088-02

胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，占消化道肿瘤的首位，在消化道恶性肿瘤死亡病例中，约有半数死于胃癌[1，2]。其发病率和死亡率不断上升，但其发病机制目前仍不清楚，因此早期诊断胃癌并及时选择合适的治疗方法非常重要。近年来的研究表明，细胞免疫是机体抗肿瘤免疫的主要方式，而T淋巴细胞及其亚群是细胞免疫中的主要效应细胞。CD3+CD4-CD8-（double negative T cell，DNT）细胞是近年来新发现的一群免疫调节性T细胞，它和CD4+CD25+调节T细胞一样，在免疫调节和抑制、抗病毒、抗肿瘤、自身免疫等方面都具有非常重要的作用[3，4]。为探讨细胞免疫在胃癌患者发病过程中的作用，我们利用流式细胞仪对43例胃癌患者、36例健康人外周血中的DNT细胞及T细胞亚群进行检测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

研究标本来源于2010年6月～2011年6月我院新入院的43例胃癌患者，男24例，女19例，年龄31～86岁，平均65岁；另选正常体检者36例作为健康对照组。两组性别、年龄经统计学处理差异无统计学意义，具有可比性。病例选择标准：所有胃癌患者均经病理确诊，未经放疗或化疗，近期无明显感染史，肝肾功能正常。

1.2 方法

1.2.1 试剂PerCP-anti-CD3/FITC-anti-CD4/PE-anti-CD8三标记单克隆抗体购自美国贝克曼库尔特有限公司。

1.2.2 仪器流式细胞仪为美国贝克曼库尔特有限公司生产的FC500型。

1.2.3 检测方法选取胃癌患者及健康者外周静脉血1 mL，EDTA-K2抗凝。严格按照三标记单克隆抗体PerCP-anti-CD3/FITC-anti-CD4/PE-anti-CD8的使用说明书进行染色，染色后上流式细胞仪检测10 000个淋巴细胞。

1.3 统计学处理

采用SPSS 18.0统计学软件和Microsoft Excel 2003进行数据统计分析，各组资料测量结果以（x±s）表示。样本符合正态分布，其差异采用独立样本t检验进行分析，P ＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌患者DNT细胞分布

胃癌患者DNT细胞比例（9.11±5.56）%高于正常对照组（4.84±1.43）%，差异有统计学意义（P ＜ 0.01），见图1。胃癌患者DNT细胞流式散点图见图2C、2D，正常健康对照组DNT细胞流式散点图见图2A、2B。

图1 胃癌患者和正常对照组DNT细胞分布情况

注：以CD3/SSC设门圈定T淋巴细胞（图A，C）并应用于CD4-FITC/CD8-PE双参数散点图（图B，D）分析DNT细胞

图2 CD3+CD4-CD8-（DNT）细胞典型流式散点图

2.2 T细胞亚群分布

胃癌患者CD8+比例高于健康对照组，差异有统计学意义（P ＜ 0.01），胃癌患者CD4+比例、CD4+/CD8+比值均低于健康对照组，差异均有统计学意义（P ＜ 0.01）。见表1。＼

表1 胃癌患者T细胞和健康对照组T细胞亚群分布（x±s）

3 讨论

近年来CD4+CD25+调节T细胞广泛受到人们的关注，它在免疫调节和抑制自身免疫性疾病等方面都发挥了非常重要的作用，而DNT细胞这群新发现的免疫调节细胞也具有免疫抑制功能，有报道称它的免疫调节作用强于CD4+CD25+调节T细胞[4，5]，DNT细胞可针对性地清除具有同样TCR特异性的已激活的CD8+细胞，并诱导抗原特异性免疫耐受[6-8]。

本文实验结果显示胃癌患者DNT细胞比例明显高于健康对照组，这与徐利军等[9]在小鼠中的研究结果一致，提示DNT细胞的异常表达可能参与了胃癌疾病的发生、发展过程，它可能通过抑制CD8＋T淋巴细胞的抗肿瘤排斥反应，从而在体内起到了抑制抗肿瘤免疫作用，但确切的作用机制目前还不清楚，有待于进一步研究。

胃癌的发生发展与机体的免疫功能密切相关，当机体的免疫功能下降时，机体的免疫清除以及免疫监视能力下降，使得肿瘤的发病率增高。

本实验结果显示胃癌患者组CD8+比例高于健康对照组，而CD4+比例、CD4+/CD8+比值均低于健康对照组，这与国内外报道一致[10-12]，这可能是机体内的免疫平衡失调，造成恶性肿瘤患者的免疫功能减退或受到抑制。

综上所述，DNT可能参与了胃癌的发病机制，深入研究DNT细胞在胃癌发病机制中的作用，不仅可为胃癌发病机制研究提供新的思路，并能为胃癌的免疫学治疗提供新的方法。

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（收稿日期：2012-04-24）