摘要：采用ＣＴＡＢ法和改良的Ｔｒｉｚｏｌ法提取贵州从江香猪（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）新鲜肝脏的总ＲＮＡ，通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测ＲＮＡ质量。结果表明，改良的Ｔｒｉｚｏｌ法提取的总ＲＮＡ的纯度高，完整性好，优于ＣＴＡＢ法。且改良的Ｔｒｉｚｏｌ法提取的猪肝脏总ＲＮＡ可用于ＲＴ－ＰＣＲ等后续分子生物学操作。

关键词：ＲＮＡ提取；猪（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）；肝脏；ＣＴＡＢ法；Ｔｒｉｚｏｌ法

中图分类号：Ｑ５９３＋．１；Ｑ５２２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）03－0621-02

Ｆａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｆｒｏｍ Ｐｉｇ Ｌｉｖｅｒ

ＹＵ Ｘｉａｏ－ｄａｎ

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｚｕｎｙｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｚｕｎｙｉ ５６３００２，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： ＣＴＡＢ ａｎｄ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔｒｉｚｏｌ ｍｅｔｈｏｄ ｗｅｒｅ ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｆｒｏｍ ｆｒｅｓｈ ｌｉｖｅｒ ｏｆ Ｃｏｎｇｊｉａｎｇ Ｘｉａｎｇ－ｐｉｇ（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ） ｉｎ Ｇｕｉｚｈｏｕ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ， ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔｒｉｚｏｌ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈｅｒ ｐｕｒｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｔｈａｎ ＣＴＡＢ ｍｅｔｈｏｄ． Ｉｔ ｗａｓ ａｌｓｏ ａｐｐｒｏｖｅｄ ｔｈａｔ ＲＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔｒｉｚｏｌ ｍｅｔｈｏｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｓｕｃｈ ａｓ ＲＴ－ＰＣＲ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＲＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ； ｐｉｇ（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）； ｌｉｖｅｒ； ＣＴＡＢ ｍｅｔｈｏｄ； Ｔｒｉｚｏｌ ｍｅｔｈｏｄ

分离出纯净完整的ＲＮＡ是进行基因表达分析及ＲＮＡ功能研究的基础，在ＲＮＡ实验中，最关键的因素是分离得到全长ＲＮＡ［１］。目前提取动物组织总ＲＮＡ的方法很多，应用较多的有苯酚法、ＣＴＡＢ法、ＳＤＳ－酚抽提法等，由于ＲＮＡ极不稳定，易被降解，ＲＮＡ酶无处不在，获得高纯度且完整的ＲＮＡ并不容易。尤其对于代谢旺盛的组织，如肝脏、心脏等的总ＲＮＡ的提取，一些方法尚有不尽如人意之处，如试剂盒法提取的成本高，ＲＮＡ产量较低，不利于后续分子生物学分析等。因此，ＲＮＡ的提取方法需要不断摸索和改进［２－４］。本实验以贵州从江香猪（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）新鲜肝脏组织为材料，采用ＣＴＡＢ法和改良的Ｔｒｉｚｏｌ法提取总ＲＮＡ，以为后续相关分子生物学操作奠定基础。

１材料与方法

１．１材料与试剂

取现宰新鲜从江香猪肝脏，－８０ ℃保存备用。实验仪器包括研钵、低温高速离心机、水浴锅、紫外分光光度计等。所用试剂有ＭＯＰＳ、０．１％ ＤＥＰＣ水、Ｔｒｉｚｏｌ、ＣＴＡＢ提取缓冲液、水饱和酚、液氮等。

１．２实验方法

１．２．１Ｔｒｉｚｏｌ法①取香猪新鲜肝脏组织０．１ ｇ置于研钵中，加入液氮快速研磨，然后加入１ ｍＬ Ｔｒｉｚｏｌ试剂，溶化后加至２．０ ｍＬ离心管中。②加入０．５ ｍＬ体积比为１∶１的氯仿－水饱和酚，上下颠倒混匀，静置几分钟，４ ℃、１３ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１５ ｍｉｎ。③吸取上层水相至另一离心管中，加入０．５ ｍＬ预冷的异丙醇混匀，室温放置１０ ｍｉｎ，４ ℃、１３ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，弃上清。……