李雪萍等

摘要：为研究不同生境下珙桐（Ｄａｖｉｄｉａ ｉｎｖｏｌｕｃｒａｔａ Ｂａｉｌｌ．）的遗传多样性，以珙桐叶片为材料优化建立珙桐的ＡＦＬＰ反应体系。对酶切与连接中ＤＮＡ的浓度、预扩增的引物、选择扩增中Ｍｇ２＋和ｄＮＴＰｓ的浓度进行梯度比较分析。结果显示，酶切与连接过程中ＤＮＡ的浓度变化对结果影响不大，预扩增的引物是否带有选择碱基对结果影响明显，选择扩增中ｄＮＴＰｓ浓度的变化对最终谱带影响不大，而Ｍｇ２＋浓度变化会对最终谱带产生影响，以１．７５ ｍｍｏｌ／Ｌ为宜。采用优化后的体系，从１２对Ｍｓｅ Ｉ、ＥｃｏＲ Ｉ引物的１４４组ＡＦＬＰ选择扩增引物组合中筛选出能够得到清晰扩增谱带的７组引物组合，为今后的研究奠定了基础。

关键词：珙桐（Ｄａｖｉｄｉａ ｉｎｖｏｌｕｃｒａｔａ Ｂａｉｌｌ．）；ＡＦＬＰ；体系优化；引物筛选

中图分类号：S792.99；Q503文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）04－0831-04

珙桐（Ｄａｖｉｄｉａ ｉｎｖｏｌｕｃｒａｔａ Ｂａｉｌｌ．）为珙桐科珙桐属落叶大乔木，是我国特有的单型属孑遗植物，是国家一级保护植物［１］。珙桐天然分布在贵州、湖南、湖北、陕西、四川、云南及甘肃７省，分布范围较窄，资源量较少，仅限于一些边远山区的人迹罕至之地［２］。珙桐素有“中国活化石”之称，在植物系统发育和地史变迁上有很高的研究价值，对珙桐进行遗传多样性研究，可以为有效保护和合理利用该珍稀植物提供必要的科学依据。目前对珙桐的研究多集中在群落生物学、人工繁殖与引种栽培方面［３－８］。

ＡＦＬＰ（Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）是荷兰科学家Ｚａｂｅａｕ等［９］和Ｖｏｓ等［10］发展起来的一种检测ＤＮＡ多态性的方法，是在ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ基础上发展起来的，具有很多突出的优点：所需ＤＮＡ量少，不需要预知ＤＮＡ序列信息，灵敏度高；多态性丰富，分辨率高，重复性好，假阳性低，可靠性高；……