罗莉，李坤，王保成，王明蓉

·综述·

包涵体变复性技术研究进展

罗莉，李坤，王保成，王明蓉

现代生物技术的迅猛发展使大规模表达异源重组蛋白成为现实，这极大地促进了蛋白类产品的开发，尤其是重组蛋白药物的研发。目前非糖基化的重组蛋白表达多采用大肠杆菌的原核表达系统，该系统的突出特点是表达产物多以包涵体形式存在。与蛋白可溶性表达相比，包涵体具有产量高、蛋白稳定、容易纯化等优点，对毒性蛋白制备尤其适宜。因此，采用包涵体形式已成为规模制备重组蛋白产品的主要途径之一。

包涵体形成的原因普遍认为主要是外源蛋白在细胞内的高表达使蛋白合成速度过快，没有时间形成正确折叠；另外原核表达系统由于缺乏蛋白翻译后修饰，也容易形成包涵体；培养条件如温度、pH 值、培养基成分等也是影响包涵体形成的因素。由于包涵体绝大多数是不溶的，没有生物活性的，因而需要经过蛋白质变性-复性的过程以恢复其生物活性。目前重组蛋白变复性过程中的技术难点主要在提高蛋白浓度和生物活性两方面，而寻找高效、快速、低成本的变复性方法是该领域研究的重点。随着重组蛋白产品研发的异军突起，包涵体变复性技术的研究再次成为了国内外关注的焦点。

1 包涵体的变性

包涵体因具有高密度（1.3 mg/ml）和高抗剪切力，在变性前常采用高压匀浆或超声的方法破碎细菌，然后再洗涤除去破碎后样品中含有的脂类、杂蛋白、核酸、脂多糖等杂质。……