倪胜辉，单风平

(1.中国医科大学临床医学七年制93期，辽宁沈阳110001;2.中国医科大学基础医学院免疫学教研室，辽宁沈阳110001)

脑啡肽(enkephalin，ENK)属于内啡肽，是一种具有生物活性的五肽。有2种天然脑啡肽存在于脑、脊髓和肠，两者的区别仅在于C端分别是亮氨酸和甲硫氨酸，甲硫氨酸脑啡肽又称蛋氨酸脑啡肽(methionine-enkephaIin，Met-ENK)。脑啡肽是神经递质的一种，能改变神经元对经典神经递质的反应，起修饰经典神经递质的作用，故称为神经调质(neuromodulator)。有研究表明Met-ENK的二聚体可以与δ-阿片受体结合，所以人们认为δ-阿片受体是Met-ENK的受体［1］。阿片生长因子(OGF，Met-ENK)进入细胞是一种通过网格蛋白介导的细胞内吞形式的主动运输［2］。目前竞争性毛细管电泳免疫分析激光诱导荧光法和毛细管电泳质谱联用(CE-MS)技术被用来Met-ENK的检测［3-4］。Met-ENK的免疫调节作用受到国内外学者的广泛关注和研究［5］，并且取得了显著地进展。本文就Met-ENK对各种免疫细胞调控及其抗肿瘤作用等方面，对近年来相关研究进展作一综述。

1 Met-ENK对吞噬细胞调节

有研究表明Met-ENK对吞噬细胞的吞噬作用有明显的调节作用，同时Met-ENK可以调节小鼠腹膜巨噬细胞H2O2的产生，并呈剂量依赖性［6］。Singh等［7］研究Met-ENK免疫调节机制时发现，浓度为10-9mol/L的Met-ENK对淡水鱼鳢毛虫脾吞噬细胞的吞噬作用起到最大的刺激作用，而对增加超氧化物的产生起到最小的效应。Met-ENK对吞噬作用和超氧化物产生的效应呈浓度相关而效应相反的一种关系，当Met-ENK浓度高于或低于10-9mol/L时MEK 对吞噬作用刺激减低而对超氧化物产生作用增加。进一步研究发现Met-ENK对淡水鱼鳢毛虫脾吞噬细胞的吞噬作用的调节时通过δ-阿片受体完成的。

2 Met-ENK对树突状细胞的调节

Liu等［8］研究发现，Met-ENK可以上调骨髓中DC的MHCⅡ和关键协同刺激分子的表达，同时DC表面的δ和κ受体的表达也相应提高。Met-ENK也可以增加DC细胞分泌高水平的细胞因子IL-12p70和TNF-α。王宁等［9］应用扫描电镜技术、酸性磷酸酶活性检测、流式细胞仪检测技术、酶联免疫吸附试验检测树突状细胞(DC)表型和功能的各种指标，使用小鼠髓系DC 2.4细胞株，电镜观察DC的超微结构，可见10-12mol/L Met-ENK处理组DC突起增多，形态上更加成熟;DC表面MHcⅡ、CD86和CD40的表达增加;酸性磷酸酶活性降低;DC白细胞介素12(IL-12)的表达增加(P＜0.05)，实验证明了适宜浓度的Met-ENK促进小鼠髓系DC 2.4的表型及功能的成熟。吴乃刚等［10］研究Met-ENK对小鼠脾源的DC分化成熟的影响，发现Met-ENK可显著刺激DC表达CDllc(+)、CD80，提高IL-12的分泌水平，在30 ng/mL时达到最大值，研究表明适当浓度的Met-ENK对DC的增殖有明显的促进作用，并可高效诱导DC成熟。

3 Met-ENK对T淋巴细胞的调节作用

Shan等［11］研究发现Met-ENK是树突细胞与CD4+T细胞之间的通路上的一种正性免疫调节剂。他们研究了树突细胞关键表面分子变化、酸性磷酸酶的活性、IL-12的产生，并分别研究了Met-ENK、Met-ENK+IL-2和Met-ENK+IFN-γ对小鼠CD4+T细胞扩增和细胞因子产生的影响。结果发现Met-ENK可以显著诱导树突细胞的成熟，通过添加鼠树突细胞表面分子如MHCⅡ、CD86和CD40，能促进IL-12的生产，和下调树突细胞内的酸性磷酸酶。同时发现在体内和体外Met-ENK单独使用或结合IL-2或IFN-γ可以明显上调CD4+T细胞扩增和CD4分子表达，Met-ENK单独或Met-ENK+IL-2可以增强CD4+T细胞产生IFN-γ。此外，Met-ENK单独或Met-ENK+IFN-γ可以提高IL-2从CD4+T细胞的生产。

章旭等［12］使用6～8周龄BALB/c雌性小鼠进行体内、外不同浓度Met-ENK刺激研究。采用RT-PCR技术检测CD4+T细胞mRNA，所得不同浓度Met-ENK刺激的CD4+T细胞mRNA和βactin条带密度比值作为相对表达强度，所得数据采用SPSS11.5软件进行统计分析。结果发现4 mg/mL Met-ENK体内刺激及10-9～10-12mol/mL的Met-ENK体外刺激促进小鼠CD4+T细胞mRNA转录;10-5～10-8mol/mL的Met-ENK抑制小鼠CD4+T细胞mRNA的转录。10-13～10-14mol/mL的Met-ENK对小鼠CD4+T细胞mRNA的转录无明显变化。另外国外有学者研究发现，Met-ENK可以通过OGF-OGFr轴来调节T淋巴细胞的增殖，并且呈剂量依赖性［13］。

4 Met-ENK对NK细胞的调节作用

Hsueh等［14］研究阿片肽对BALB/c小鼠中枢NK细胞活性影响时，对小鼠小脑延髓池直接注射Met-ENK(0.02 mg/只或1 mg/kg)，结果发现Met-ENK可以明显增加NK细胞的活性。然而另有学者发现，对小鼠进行Met-ENK慢性治疗会使小鼠体内NK细胞活性略有下降［15］。Burger等［16］给感染流感病毒的小鼠使用Met-ENK处理，结果发现Met-ENK不仅可以增加T细胞的含量，还可明显增加NK细胞的含量。

5 Met-ENK对中性粒细胞的调节作用

有学者研究发现，Met-ENK可以显著提高中性粒细胞的活性［17］。有研究表明Met-ENK可以上调中性粒细胞表面的CD11b和CD18颗粒［18］。Haberstock等［19］研究发现，Met-ENK是一种人中性粒细胞调节剂，Met-ENK可以促进中性粒细胞超氧化物()的产生，对炎症反应过程具有显著意义。

6 Met-ENK抗肿瘤作用及其免疫调节机制

有研究表明Met-ENK与α-促肾上腺皮质激素1-13联合使用具有治疗免疫介导性疾病和恶性肿瘤的作用［20］。Glavas-Obrovac等［21］研究发现Met-ENK可以明显抑制喉表皮样癌细胞(HEp-2)和人结肠癌细胞(SW620)的生长。Wang等［22］用固相合成法合成Met-ENK，制备成注射液，对经放化疗后免疫系统受到伤害的晚期肿瘤志愿者进行治疗，经静脉滴注15 d。志愿者免疫系统指标全面迅速恢复，淋巴细胞亚群同比例趋于合理，证明Met-ENK可以用于癌症患者免疫系统的恢复治疗。孟静娟等［23］应用动物移植性肿瘤的体内试验法，分别观察Met-ENK、IFN-γ和Met-ENK+IFN-γ对肿瘤的抑瘤作用及小鼠生命延长率情况。Met-ENK组、IFN-γ组和Met-ENK+IFN-γ组的抑瘤作用与生理盐水对照组比较均有显著差异(P＜0.001);而生命延长率Met-ENK组与生理盐水对照组比较有显著差异(P＜0.001)，IFN-γ组与生理盐水对照组比较无显著差异(P＞0.001)，Met-ENK+IFN-γ组与生理盐水对照组比较有显著差异(P＜0.001)。可见，Met-ENK、IFN-γ和Met-ENK+IFN-γ都对小鼠移植性瘤有一定的抑制作用，Met-ENK和Met-ENK+IFN-γ能够延长小鼠生命。同时有研究发现Met-ENK联合白细胞介素-2同样具有很明显的抗肿瘤作用［24］。

Kuniyasu等［25］研究发现Met-ENK可以明显抑制大肠癌细胞的生长、侵袭和存活。他们给接种了大肠癌细胞的小鼠使用Met-ENK进行治疗，发现小鼠肝中Met-ENK表达增加。使用胆固醇的共轭反义S-寡核苷酸抑制肝Met-ENK表达后出现明显的大肠癌肝转移。研究发现Met-ENK其抗肿瘤机制是激活δ-阿片受体降低表皮生长因子受体和细胞外信号调节激酶磷酸化，增加p38-依赖的细胞凋亡。Ohmori等［26］对Met-ENK作为大肠癌的免疫调节剂的作用进行了研究。发现Met-ENK可以抑制MOLT-4 T淋巴母细胞的生长并呈剂量依赖性，Met-ENK可以增加c-Jun N-末端激酶磷酸化水平和诱导Molt-4细胞凋亡，Met-ENK的这种特性可以使机体免于免疫反应。

7 Met-ENK对免疫疾病的治疗

Xu等［27］研究Met-ENK对感染猴免疫缺陷病毒72 h后的CEM×174细胞存活能力、细胞周期、细胞凋亡和凋亡相关基因表达影响，实验数据表明Met-ENK可以维持长期感染免疫缺陷病毒细胞的存活。通过进一步研究发现Met-ENK维持细胞存活是通过抑制病毒诱导的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3过度表达完成的，他们的研究表明Met-ENK可以用于临床艾滋病的治疗。Zagon等［28］研究发现T淋巴细胞数与阿片生长因子-阿片生长因子受体轴有紧密联系，Met-ENK作为阿片生长因子可以明显抑制T淋巴细胞数量，并且呈剂量依赖性。阿片生长因子-阿片生长因子受体轴具有免疫抑制作用，可以用来治疗自身免疫疾病。有研究表明风湿性关节炎病人的免疫细胞中的Met-ENK和感觉神经末梢中Met-ENK受体明显高于关节创伤和骨关节炎病人。机体在长期和强化的炎症下，免疫和外周神经系统上调感觉神经阿片受体和配体的表达，来调节疼痛和炎症的平衡［29］。

8 展望

目前Met-ENK的免疫调控和生理作用机制已经得到深入的研究，研究发现Met-ENK除了前文提到的对免疫系统的调控作用外，Met-ENK对内分泌系统和酶也具有相应的调节作用［30-31］。并且有学者发现Met-ENK与肝炎疾病的发生发展［32-33］和神经系统中的多巴胺受体［34-35］以及阿片受体［6，36］有着密切的联系。目前其药理作用也受到人们的广泛关注，有研究表明Met-ENK是一种低毒性安全可靠的药物［37］，其临床治疗作用的研究已经取得了相应的成果，其中包括Met-ENK

对哮喘的治疗［38］，调节心肌细胞生长保护心肌［39-40］，和作为一种镇痛剂的应用［41-42］。特别是Met-ENK的抗肿瘤作用目前倍受学者关注，也将是Met-ENK临床应用研究的重要方向。希望人们对Met-ENK的研究更加透彻深入，Met-ENK能够广泛的应用于临床，为病人解除病痛的折磨。

［1］ Wu YC，Hsieh JY，Lin HC，et al.Conformational stability and three-dimensional model of the delta-opioid pharmacophore for the extended antiparallel dimer structure of Met-enkephalin in water［J］.J Mol Model，2007，13(1):171-177.

［2］ Cheng F，McLaughlin PJ，Banks WA，et al.Internalization of the opioid growth factor，［Met5］-enkephalin，is dependent on clathrin-mediated endocytosis for downregulation of cell prolifer-ation［J］.Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol，2010，299(3):774-785.

［3］ Babu CV，Chung BC，Lho DS，et al.Capillary electrophoretic competitive immunoassay with laser-induced fluorescence detection formethionine-enkephalin［J］.J Chromatogr A，2006，1111(2):133-138.

［4］ Ramautar R，Ratnayake CK，Somsen GW，et al.Capillary electrophoresis-mass spectrometry using an in-line sol-gel concentrator for the determination of methionine enkephalin in cerebrospinal fluid［J］.Talanta，2009，78(2):638-642.

［5］ Marotti T，Gabrilovac J，Rabatic S，et al.Met-enkephalin modulates stress-induced alterations of the immune response in mice［J］.Pharmacol Biochem Behav，1996，54(1):277-284.

［6］ Stanojeviĉ S，Vujiĉ V，Mitiĉ K，et al.Methionine-enkephalin modulation of hydrogen peroxide(H2O2)release by rat peritoneal macrophages involves different types of opioid receptors［J］.Neuropeptides，2008，42(2):147-158.

［7］ Singh R，Rai U.Delta opioid receptor-mediated immunoregulatory role of methionine-enkephalin in freshwater teleost Channa punctatus(Bloch.)［J］.Peptides，2009，30(6):1158-1164.

［8］ Liu J，Chen W，Meng J，et al.Induction on differentiation and modulation of bone marrow progenitor of dendritic cell by methionine enkephalin(MENK)［J］.Cancer Immunol Immunother，2012，［Epub ahead of print］.

［9］ 王宁，夏燕杰，单风平.蛋氨酸脑啡肽对树突状细胞表型及功能的影响［J］.中国免疫学杂志，2010，26(9):814-817.

［10］ 吴乃刚，刘江秋，薛采芳，等.蛋氨酸脑啡肽对DC分化成熟的影响［J］.辽宁大学学报，2007，34(1):47-49.

［11］ Shan F，Xia Y，Wang N，et al.Functional modulation of the pathway between dendritic cells(DCs)and CD4+T cells by the neuropeptide:methionine enkephalin(MENK)［J］.Peptides，2011，32(5):929-937.

［12］ 章旭，夏燕杰，王宁，等.细胞生物活性肽-蛋氨酸脑啡肽对小鼠CD4+T细胞mRNA的影响［J］.微生物学杂志，2010，30(1):106-109.

［13］ Zagon IS，Donahue RN，Bonneau RH，et al.T lymphocyte proliferation is suppressed by the opioid growth factor(［Met(5)］-enkephalin)-opioid growth factor receptor axis:implication for the treatment of autoimmune diseases［J］.Immunobiology，2011，216(5):579-590.

［14］ Hsueh CM，Hiramoto RN，Ghanta VK.The central effect of methionine-enkephalin on NK cell activity［J］.Brain Res，1992，578(1-2):142-148.

［15］ Zalys R，Zagon IS，Bonneau RH，et al.In vivo effects of chronic treatment with［MET5］-enkephalin on hematological values and natural killer cell activity in athymic mice［J］.Life Sci，2000，66(9):829-834.

［16］ Burger RA，Warren RP，Huffman JH，et al.Effect of methionine enkephalin on natural killer cell and cytotoxic T lymphocyte activity in mice infected with influenza A virus［J］.Immunopharmacol Immunotoxicol，1995，17(2):323-334.

［17］ Menzebach A，Hirsch J，Hempelmann G，et al.Effects of endogenous and synthetic opioid peptides on neutrophil function in vitro［J］.Br J Anaesth，2003，91(4):546-550.

［18］ Pa'cnik J，Tchórzewski H，Baj Z，et al.Priming effect of metenkephalin and beta-endorphin on chemiluminescence，chemotaxis and CD11b molecule expression on human neutrophils in vitro［J］.Immunol Lett，1999，67(2):77-83.

［19］ Haberstock H，Marotti T.Methionine-enkephalin primes human neutrophils for enhanced superoxide anion production［J］.Immunopharmacol Immunotoxicol，1997，19(1):135-145.

［20］ Mulabegoviĉ N，Rakanoviĉ-Todiĉ M.Pharmacodynamic properties of a combination of met-enkephalin and alpha 1-13 adrenocorticotropic hormone［J］.Med Arh，2008，62(1):41-44.

［21］ Glavas-Obrovac L，Jakas A，Marczi S，et al.The influence of cell growth media on the stability and antitumour activity of methionine enkephalin［J］.J Pept Sci，2005，11(8):506-511.

［22］ Wang DN，Meng JJ，Lv CL，et al.Immune system restore 0n terminal cancer patients by bio-peptide:Methionine Enkephalin(MEK)［J］.Journal of microbiology，2008，28(5):39-41.

［23］ 孟静娟，王大南，单风平，等.蛋氨酸脑啡肽(MEK)联合干扰素Y抗肿瘤作用研究［J］.微生物学杂志，2009，29(1):107-109.

［24］ 孟静娟，单风平.蛋氨酸脑啡肽联合白细胞介素-2抗肿瘤作用研究［J］.微生物学杂志，2010，30(l):64-67.

［25］ Kuniyasu H，Luo Y，Fujii K，et al.CD10 enhances metastasis of colorectal cancer by abrogating the anti-tumoural effect ofmethionine-enkephalin in the liver［J］.Gut，2010，59(3):348-356.

［26］ Ohmori H，Fujii K，Sasahira T，et al.Methionine-enkephalin secreted by human colorectal cancer cells suppresses T lymphocytes［J］.Cancer Sci，2009，100(3):497-502.

［27］ Xu J，Xin S，Li H，et al.Involvement of caspase-3 pathway in anti-apoptotic action of methionine enkephalin on CEM x 174 cells in prolonged infection with simian immunodeficiency virus in vitro［J］.Cell Biol Int，2006，30(2):114-121.

［28］ Zagon IS，Donahue RN，Bonneau RH，et al.T lymphocyte proliferation is suppressed by the opioid growth factor(［Met(5)］-enkephalin)-opioid growth factor receptor axis:implication for the treatment of autoimmune diseases［J］.Immunobiology，2011，216(5):579-590.

［29］ Mousa SA，Straub RH，Schäfer M，et al.Beta-endorphin，Met-enkephalin and corresponding opioid receptors within synovium of patients with joint trauma，osteoarthritis and rheumatoid arthritis［J］.Ann Rheum Dis，2007，66(7):871-879.

［30］ Rodríguez Díaz MA，Candal E，Santos-Durán GN，et al.Comparative analysis of Met-enkephalin，galanin and GABA immunoreactivity in the developing trout preoptic-hypophyseal system［J］.Gen Comp Endocrinol，2011，173(1):148-158.

［31］ Sobocanec S，Kusiĉ B，Sverko V，et al.Methionine-enkephalin modulated regulation of oxidant/antioxidant status in liver of CBA mice［J］.Biogerontology，2006，7(1):53-62.

［32］ Cie'sla A，Mach T，Pierzchała-Koziec K，et al.Met-enkephalin in the liver as a marker of hepatocellular damage in chronic viral hepatitis type B and C［J］.Adv Med Sci，2006，51:261-264.

［33］ Boyella VD，Nicastri AD，Bergasa NV.Human hepatic met-enkephalin and delta opioid receptor-1 immunoreactivities in viral and autoimmune hepatitis［J］.Ann Hepatol，2008，7(3):221-226.

［34］ Méndez M，Barbosa-Luna IG，Pérez-Luna JM，et al.Effects of acute ethanol administration on methionine-enkephalin expression and release in regions of the rat brain［J］.Neuropeptides，2010，44(5):413-420.

［35］ Assis MA，Valdomero A，García-Keller C，et al.Decrease of lymphoproliferative response by amphetamine is mediated by dopamine from the nucleus accumbens:influence on splenic met-enkephalin levels［J］.Brain Behav Immun，2011，25(4):647-657.

［36］ Terashvili M，Tseng LF，Wu HE，et al.Antinociception produced by 14，15-epoxyeicosatrienoic acid is mediated by the activation of beta-endorphin and met-enkephalin in the rat ventrolateral periaqueductal gray［J］.J Pharmacol Exp Ther，2008，326(2):614-622.

［37］ Lugo JN Jr，Wilson MA，Kelly SJ.Perinatal ethanol exposure alters met-enkephalin levels of male and female rats［J］.Neurotoxicol Teratol，2006，28(2):238-44.

［38］ Stanojevi'c S，Miti'c K，Vuji'c V，et al.The influence of stress and methionine-enkephalin on macrophage functions in two inbred rat strains［J］.Life Sci，2007，80(10):901-909.

［39］ Cao Z，Liu L，Packwood W，et al.Sex differences in the mechanism of Met5-enkephalin-induced cardioprotection:role of PI3K/Akt［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2008，294(1):302-310.

［40］ van den Brink OW，Cochrane AD，Rosenfeldt FL，et al.Increased myocardial methionine-enkephalin with reduced arterial oxygenation in congenital heart disease［J］.J Paediatr Child Health，2010，［Epub ahead of print］.

［41］ Kiguchi N，Maeda T，Tsuruga M，et al.Involvement of spinal Met-enkephalin in nicotine-induced antinociception in mice［J］.Brain Res，2008，1189:70-77.

［42］ Sugaya I，Qu T，Sugaya K，et al.Genetically engineered human mesenchymal stem cells produce met-enkephalin at augmented higher levels in vitro［J］.Cell Transplant，2006，15(3):225-230.