郑国庆 董其谦 王小同 王纪佐 顾 勇 沈剑刚

1浙江省温州医学院附属第二医院，温州325027；2天津医科大学第二医院，天津300211；3香港大学中医药药学院，香港

目的：研究缺血／缺氧后，小凹蛋白-1对基质金属蛋白酶在脑微血管内皮细胞表达的调节作用。方法：在体分离脑缺血／再灌注损伤大鼠的脑微血管，采用免疫印迹法检测小凹蛋白-1、基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达；采用免疫荧光检测缺血／再灌注损伤后脑微血管小凹蛋白-1的表达；采用原位明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶-2／-9活性。应用针对小凹蛋白-1的特异性小分子干扰RNA处理后，采用体外明胶酶谱法检测原代培养的脑血管内皮细胞基质金属蛋白酶-2活性。结果：在分离的脑微血管内皮细胞中，基质金属蛋白酶-2的表达在缺血／再灌注6h明显升高，而基质金属蛋白酶-9在缺血／再灌注损伤48h时显著增加。与假手术组比较，缺血／再灌注损伤后基质金属蛋白酶活性明显增加。在分离的脑微血管内皮细胞中，缺血／再灌注损伤6h、24h和48h，小凹蛋白-1表达下降；缺血／再灌注组的小凹蛋白-1阳性微血管数减少。与对照组比较，特异性小分子干扰RNA干预后24h小凹蛋白-1表达水平下降。体外明胶酶谱法检测显示，小凹蛋白-1引起脑微血管内皮细胞培养基中基质金属蛋白酶活性增加。结论：小凹蛋白-1可能是与脑缺血／再灌注损伤后基质金属蛋白酶活化和血脑屏障破坏有关的一个关键蛋白质。