王蓓蓓 张腾腾 张利军 魏俊燕 张俊霞 张丽莙

天津医科大学基础医学院病理生理学教研室，天津300070；＃通讯作者

目的：观察肺炎衣原体（C.pn）感染对血管平滑肌细胞（VSMC）迁移的影响，探讨TLR2－PI3K／Akt信号转导通路在C.pn感染诱导VSMC迁移中的作用。方法：组织贴块法行大鼠原代VSMC培养；免疫荧光法确认C.pn成功感染VSMC；Wound－healing assay和Transwell assay观察C.pn感染对VSMC迁移能力的影响；基因芯片技术分析感染后VSMC TLR2基因表达的改变；使用C.pn和TLR2单克隆抗体行免疫荧光染色，共聚焦显微镜观察感染后C.pn与TLR2在VSMC内的共定位；RT－PCR、Western blotting分别检测感染后不同时间点TLR2和PI3KmRNA和Akt磷酸化水平；分别用TLR2阻断剂和PI3K抑制剂LY294002预处理VSMC，Western blotting检测感染后VSMC Akt磷酸化水平，Wound－healing assay和Transwell assay观察VSMC迁移能力的改变。结果：成功建立C.pn感染VSMC模型。Wound healing assay和Transwell assay结果显示C.pn感染可明显促进VSMC迁移（PP＜0.05）；基因芯片结果显示C.pn感染后TLR2基因表达明显上调；共聚焦显微镜观察到C.pn感染VSMC后，TLR2聚集于C.pn包涵体周围；RT－PCR结果表明感染后TLR2表达水平迅速升高，8h达高峰，可持续至24h；Western blotting结果显示，感染30min后p－Akt表达水平开始升高，1h达高峰，6h开始下降，并持续至24h；TLR2阻断剂预处理的C.pn感染组较单纯感染组p－Akt表达水平明显降低（P＜0.05），LY294002可显著抑制C.pn感染诱导的p－Akt的表达水平上调（P＜0.05）；C.pn感染组VSMC的迁移能力明显高于TLR2阻断剂或PI3K抑制剂预处理的感染组（P＜0.05）。结论：C.pn感染可能通过TLR2－PI3K／Akt信号转导通路诱导VSMC迁移。

＊国家自然科学基金（No：30971225）；高校博士点专项科研基金（No：20111202110011）