黄瓜L-半乳糖-1，4-内酯脱氢酶cDNA全长的克隆和遗传转化

2012-03-12苑志明劳杉杉秦智伟周秀艳

东北农业大学学报 2012年7期

关键词：检测

苑志明，劳杉杉，秦智伟，周秀艳

（东北农业大学园艺学院，哈尔滨 150030）

维生素C别名抗坏血酸（Ascorbic acid，AsA），是藻类、高等植物和大多数动物体内合成的一种己糖内酯化合物。抗坏血酸可以清除生物体内代谢产生的活性氧（Reactive oxidative species，ROS），一定浓度的ROS是生物体内必须的，但ROS浓度过高会造成细胞损伤，引起生物衰老和死亡，逆境会造成植物体内ROS升高[1]。高等植物抗坏血酸合成的L-半乳糖途径中，L-半乳糖-1，4内酯由GalLDH直接氧化成抗坏血酸，GalLDH是抗坏血酸合成过程中的关键酶之一[2]。

由于人体内缺乏抗坏血酸合成过程中的关键酶，只能从食物中摄取[3]。因此，园艺产品中的AsA含量已成为衡量品质的重要指标。黄瓜中抗坏血酸含量较低，到目前为止没有研究能解释这种现象。本试验通过克隆黄瓜中抗坏血酸合成的关键酶GalLDH，为今后研究黄瓜中抗坏血酸含量较低的原因，改良黄瓜的营养品质奠定一定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

供试材料为黄瓜D08108果肉，由东北农业大学园艺学院黄瓜课题组提供。雌花自然开花后10 d采样，将果肉切成薄片用锡纸包好，并用液氮速冻后存于-80℃冰箱，用于提取RNA。将幼嫩的番茄（HN11）叶片称取0.2 g用锡纸包好，并用液氮速冻后存于-80℃冰箱，用于提取DNA。番茄品种由东北农业大学园艺学院提供。

载体pBI121和农杆菌由东北农业大学园艺学院实验室提供。黄瓜组织培养外植体选用栽培品种649，由东北农业大学园艺学院黄瓜课题组提供。