大豆食心虫28SrDNA基因的克隆及表达分析
2012-03-12李冬梅孟凡立王志坤臧振源李文滨
李冬梅,孟凡立,王志坤,臧振源,孙 晶,李文滨
(东北农业大学农学院,大豆生物学教育部重点实验室,哈尔滨 150030)
大豆食心虫(Leguminivora glycinivorella Matsumurav)属鳞翅目(Lepidoptera)小卷蛾科(Olethreutidae),是东北大豆产区最严重的一种害虫,以幼虫钻蛀豆荚取食豆粒,将豆粒咬成沟道或残破状,严重影响大豆产量和品质[1]。豆农每年至少使用2次化学杀虫剂对大豆食心虫进行防治。现在使用的化学杀虫剂多为广谱性杀虫剂,可杀死目标昆虫,也会杀死有益昆虫。同时化学杀虫剂在自然界可长期存在,在土壤和河流中逐渐积累,破坏土壤和河流的生态环境;化学杀虫剂还可以通过食物链进入人体,诱发致畸、致癌,严重损害健康。利用传统育种方法培育抗大豆食心虫的大豆品种虽有效,但周期长、效率低。因而,急需探索防治大豆食心虫的新方法,以精确、高效地控制大豆食心虫。
Fire等在研究反义RNA在线虫Caenorhabditis elagans中的基因阻断作用时,首先发现利用纯化的外源dsRNA能够高效特异性阻断内源基因表达,并将这一现象称为 RNAi(RNA interference)[2]。由于RNAi技术沉默基因的高效性和特异性,人们提出通过转基因手段,让植物体内表达昆虫基因的dsRNA,dsRNA经昆虫取食后进入虫体内,对昆虫靶基因进行RNA干扰,从而特异性抑制靶基因表达,提高植物抗虫性[3-6]。中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所陈晓亚院士实验室的研究成果证明,昆虫取食表达dsRNA的转基因植物后,体内相应的靶基因受到抑制,提高植物的抗虫性[7]。Mao等先通过转基因手段,让拟南芥和烟草表达棉铃虫参与棉毒素解毒的P450基因dsRNA。……
