黄丽，方维焕,，俞盈，宋厚辉

1 浙江农林大学动物科技学院，浙江 临安 311300

2 浙江大学动物预防医学研究所 浙江省动物预防医学重点实验室，浙江 杭州 310058

光激活定位显微成像技术 (Photo-activated localization microscopy，PALM) 是最近几年来才逐渐发展起来的、可以在活体水平进行的、且分辨率达到纳米级别、并优于激光共聚焦和双光子显微镜的新一代三维成像技术[1-2]。该技术的原理是采用荧光基团修饰技术，将各种常见的荧光蛋白进行突变，突变后的蛋白在光束下 (一般为405 nm激光或者紫外) 被活化，并释放出光子信号，然后利用光激活定位显微镜进行捕获和识别，最终可以捕捉到单分子信号，分辨率达到5~20 nm或者更高[2]，其中分辨率的高低取决于荧光蛋白的特性。目前可以被光子激活(Photoactivatable，PA) 的荧光蛋白有：PAGFP[3]、 PAmCherry[4]、mEos2[5]、PATagRFP[6]等。如果这些蛋白不被405 nm激光激活，在普通荧光显微镜下不呈现任何荧光 (mEos2除外)，在光激活定位显微镜下也不释放任何信号。但是这些荧光蛋白一旦被激活，PAGFP[3]、PAmCherry[4]、PATagRFP[6]等在普通显微镜下将呈现荧光，例如：PAGFP被激活后，在荧光显微镜下为绿色荧光。但对于在普通荧光显微镜下呈现绿色荧光的mEos2，被405 nm激光激活后，将表现出红色荧光 (即出现光转换现象，Photoconvertable)，随着激发时间延长，绿色荧光越来越弱，而红色荧光越来越强，且释放出光子。

病原菌膜蛋白作为潜在的药物靶位、细胞受体和纳米通道越来越受到研究者的关注[7-9]。对于未知功能的膜蛋白，在研究的初始阶段仍然需要依赖生物信息学软件，通过已公布的基因组学信息，对蛋白结构和功能进行预测，进而通过实验设计进行验证，包括：膜蛋白表达、纯化、鉴定、分离和定位研究等[10]。……