牛γ-干扰素在大肠杆菌中的表达及抗原性鉴定
2012-02-01刘巧荣乔明明申屠芬琴马永缨田克恭陈西钊
刘巧荣,孙 明,乔明明,杨 璐,申屠芬琴,马永缨,曹 振,田克恭,陈西钊,
(1.北京世纪元亨动物防疫技术有限公司,北京 100085;2.中国动物疫病预防控制中心,北京 100094)
研究意义:干扰素(interferon,IFN)是一种多效性细胞因子,主要由活化的 T淋巴细胞产生,具有广泛抗病毒、抗肿瘤及免疫调节功能。根据产生干扰素的细胞来源、理化性质及生物学活性的差异,哺乳动物的干扰素可分为 5类,即 α、β、τ、ω及γ[1]。与其它型比,IFN-γ除具有抗病毒活性和抗肿瘤活性外,还有更强的免疫调节活性,能促进MHC II类抗原表达、增强抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)与 T细胞的相互作用、增强辅助性T细胞活性和细胞毒性T细胞产生的能力等,是机体发挥免疫功能,清除体内病原体不可缺少的成分,因此,IFN-γ成为现代分子生物学,免疫学和临床医学研究的热点之一。
前人的研究进展:Douglas等(1986)首先对BovIFN-γ进行了原核表达,发现重组 BovIFN-γ蛋白在MDBK细胞系上的活性为 1.15×105U/m L。此后,国内外学者用大肠杆菌、毕赤酵母、疱疹病毒和杆状病毒等表达载体对其进行了表达研究[2-6]。研究表明,BovIFN-γ在抗水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛白血病病毒以及副流感-3型病毒的试验中均取得了良好效果。另外,通过检测牛血液中的 IFN-γ用于诊断牛结核病,目前已经有BovIFN-γ检测试剂盒出售[7]。
本研究切入点:本研究旨在应用基因工程技术实现BovIFN-γ的高效表达,鉴定其抗原活性。为制备BovIFN-γ检测试剂盒奠定基础。
1 材料和方法
1.1 载体和菌株
pGEM-T-Easy、PET-28a载体,购自 Promega公司。
1.2 主要试剂
TaqDNA聚合酶、dNTP和胶回收试剂盒购自Promega公司,氨苄青霉素和IPTG购自于Sigma公司。……
