占玲俊，鲍琳琳，李枫棣，吕 琦，许黎黎，秦 川

（1.中国医学科学院医学实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 100021）

雪貂是研究流感感染的理想动物模型，由于其呼吸道上皮与人的呼吸道上皮相似，因此其感染的敏感性，传播方式以及临床症状与人感染的相似，常用于病毒的致病研究和疫苗的评价［1］。

检测感染流感的雪貂病毒载量是流感的诊断，检测和研究中常用的实验技术，其灵敏度高，特异性好，方法快捷。尤其对高致病性流感的检测和研究有重要用途，当感染样品经过初处理后，就不需要在ABSL-3实验室进行操作，而可以转到ABSL-2实验室甚至是普通实验室进行后续的定量检测，免去了操作上的繁琐和不便［1］。

荧光定量PCR系统体系是非常灵敏的体系，组织样品的质量，引物的特异性是决定 SYBR Green PCR定量结果可信度的关键。在准备定量 PCR的样品模板时，有多种方法可以提取RNA，由于组织样品的成分较复杂，不同组织的最优提取方法会不同，另外不同试剂盒提取相同的组织RNA的质量不同，去除PCR干扰因子比如基因组DNA，盐份，糖份，某些未知的成分的情况也不同。

最常见的RNA提取方法是柱子法和有机试剂法，其中柱子法以 Qiagen公司的 RNeasy m ini kit （cat.74106）应用最广泛，该试剂盒针对液体样品，培养的细胞系，小鼠和大鼠的组织研发，最常用于鼻咽拭子的流感病毒载量的检测；QIAampViral RNA M ini Kit（Qiagen）用于咽拭子或者气道灌洗液以及培养细胞的 RNA的提取［1］。……