胡佳佳，恽时锋，王 芳，范志宇，胡 波

（1.江苏省农业科学院兽医研究所，农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏 南京 210014； 2.南京军区南京总医院比较医学科，江苏 南京 210002）

支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica，Bb）是广泛感染家畜、野生动物和实验动物上呼吸道的一种革兰氏阴性球杆菌，常引起家兔发生传染性鼻炎和支气管肺炎，更重要的是，Bb的先期感染易于导致其它多种细菌的继发性感染，如多杀性巴氏杆菌、葡萄球菌等［1，2］，从而增加兔群呼吸道疾病的发病率和严重程度，同时也为 Bb的分离检测增加了一定的难度。近年来，人们发现Bb可经动物传染给人，并在免疫功能缺陷或低下的人群（如AIDS患者）体内形成严重感染［3-5］。因此，本病具有一定的公共卫生意义。

目前，Bb的诊断方法主要是细菌学检查、血清学凝集试验、PCR检测等，未找到引用源。而常规的细菌学检查过程繁琐、费时费力；血清学凝集试验和PCR检测方法常出现假阳性结果［7］，因此，建立一种快捷、高效、敏感、特异的检测方法对本病的防控尤为重要。研究表明，百日咳杆菌粘附素（pertactin，PRN）是Bb最重要的粘附因子和抗原成分［8］，由prn基因编码的一种具有保护性的自动转运蛋白，属于膜相关抗原，存在菌体外膜上，也存在于液体培养物上清中［9］，prn还可被病原菌利用以加强自身的附着作用［10］。本研究以临床病例中分离的高毒力兔 Bb菌株（BJL0504）的基因组为模板，对 PRN基因进行了克隆、序列分析及原核表达，并将表达蛋白作为抗原，建立了检测 Bb抗体的间接ELISA方法，为更好地防治本病奠定基础。……