杨 艳，陈光勇，刘光明

（1.云南省大理州人民医院，云南 大理 671000；2.大理学院药学院，云南 大理 671000）

侗族传统抗风湿药对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用＊

杨 艳1，陈光勇2△，刘光明2

（1.云南省大理州人民医院，云南 大理 671000；2.大理学院药学院，云南 大理 671000）

目的：研究了侗族传统抗风湿药对佐剂性关节炎（adjuvant arthritis，AA）大鼠的治疗作用。方法：采用大鼠足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠AA模型。足容积法测量继发侧足肿胀度，进行疼痛评分和多发性关节炎评分。结果：侗族传统抗风湿药2000 mg·kg－1·d－1剂量组于第14 d开始不同程度降低AA大鼠继发侧足肿胀度、关节疼痛评分、多发性关节炎指数（P＜0.05）。结论：侗族传统抗风湿药对佐剂性关节炎大鼠有明显的抗炎治疗作用。

侗族传统抗风湿药；佐剂性关节炎大鼠；弗氏完全佐剂；抗炎

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种慢性自身免疫性疾病，严重危害着人类的身体健康。开发标本兼治、安全有效、毒副作用较小的天然药物有着重要的实际价值。佐剂性关节炎（adjuvant arthritis，AA）大鼠模型是评价防治RA药物的常用动物模型之一［1～2］。本研究观察了侗族传统抗风湿药浸膏对AA大鼠继发侧关节肿胀度、关节疼痛评分的影响、多发性关节炎指数的影响，旨在为开发治疗RA的有效药物提供实验依据和理论基础。

1 材料和方法

1.1 实验动物 健康SD大鼠（SPF级）60只（5～6月龄），雌雄各半，质量（160～180）g，云南白药集团天然药物研究院提供，合格证号：滇实动证字第2001039号。动物保护、使用和所有程序都按照动物伦理委员会的要求操作。动物于实验前适应环境3天，自由摄食和饮水，自然光照，控制室温（20±2）℃。

1.2 药物与试剂 X浸膏（6种侗族传统用药配伍药材20 kg，用20倍体积75% 乙醇室温浸泡48 h，共3次，于45℃旋转蒸发仪中回收乙醇而得的棕色半流动状物2 kg，由大理学院药学院提供）；卡介苗（上海生物制品研究所，批号200404001）；尼美舒利（天津药物研究院药业公司，批号040407）。

1.3 仪器足容积测量仪 自制。

1.4 方法

1.4.1 动物分组和模型制备 SD大鼠随机分为6组，正常对照组、模型组、模型组＋X浸膏（高、中、低剂量）组、模型组＋ 尼美舒利组（阳性组），每组8只大鼠，雌雄各半。以弗氏完全佐剂（卡介苗70℃、1 h灭活后与高压灭菌的液体石蜡充分碾磨混匀配成10 g.L－1的乳剂）于每鼠右后足趾皮内注射0.1 mL致炎；正常对照组以生理盐水做对照。

1.4.2 药物治疗 X浸膏稀释于灭菌水中，尼美舒利溶解于灭菌水中，根据预实验结果确定药物剂量。抗风湿药浸膏的给药剂量分别为高剂量 400 mg·kg－1·d－1、中剂量200 mg·kg－1·d－1、低剂量100 mg·kg－1·d－1，尼美舒利的给药剂量为10 mg·kg－1·d－1。初次致炎的同时灌胃给药，每日1次，连续30 d。对照组和模型组灌胃灭菌水做对照。

1.4.3 观察和测量指标 每天观察大鼠进食和精神状态。各大鼠于致炎前（0d）、致炎后14、23、30 d分别在足容积测量仪上测定左侧（继发侧）足容积，并计算其肿胀度。

1.5 全身关节病变程度评价 致炎后14、23、30 d观察并记录全身关节病变程度，全身病变按5级评分法评价，根据未注射佐剂的其余3个肢体的病变程度累计积分，计算出多发性关节炎指数（polyarthritis index，AI）。0分：无红肿；l分：趾关节红肿；2分：趾关节和足跖肿胀；3分：踝关节以下的足爪肿胀；4分：包括踝关节在内的全部足爪肿胀。各个关节的累计积分即为每只大鼠的AI。

1.6 疼痛实验参照CZJ评分标准 将大鼠装进特制的鼠筒内，后腿及尾部伸出筒外，稳定几分钟后向脚掌侧缓慢屈曲动物的左侧踩关节，每隔5 s进行1次，共5次。屈关节时，动物出现嘶叫或短促而明显的缩腿反应则评为1分，无反应为0分，每只大鼠左侧关节疼痛反应的评分为0～5分。

2.1 对AA大鼠继发侧关节肿胀度的影响 模型组在致炎后14、23、30 d，与正常组比较，模型组的继发侧足肿胀度明显增加；给药14 d后，与尼美舒利组（阳性组）比较，X浸膏200 mg·kg－1·d－1剂量组可减轻AA大鼠的足肿胀度。其他剂量组作用不明显（见表1）。

表1 X浸膏对AA大鼠继发侧关节肿胀度的影响（±s，n＝10）

表1 X浸膏对AA大鼠继发侧关节肿胀度的影响（±s，n＝10）

与AA大鼠模型组比较，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；与正常组比较，＃P＜0.05

分组 剂量（mg·kg－1·d－1关节肿胀度（%）14 d 23 d 30 d正常组 —）3.46±1.40 7.34±2.43 10.87±2.72 AA大鼠 — 19.35±13.36＊＊26.80±14.61＊＊25.56±13.84＊尼美舒利 10 7.42±4.80＃ 15.99±6.63＃ 15.86±4.04 100 16.74±7.90 23.27±6.93 22.78±6.13 X浸膏 200 7.15±3.68＃ 18.22±14.15 17.97±17.11 400 12.48±8.63 26.48±11.49 25.72±12.11

2.2 对关节疼痛评分的影响 模型组关节疼痛反应升高，X浸膏200 mg·kg－1·d－1用药14 d对AA大鼠关节疼痛明显缓解，而其它剂量组则无明显影响（表2）。

表2 X浸膏对AA大鼠关节疼痛评分的影响（±s，n＝10）

表2 X浸膏对AA大鼠关节疼痛评分的影响（±s，n＝10）

与 AA大鼠模型组比较，＊P＜0.05，与正常组比较＃＃P＜0.01，＃＃＃P＜0.01

分组 剂量（mg·kg－1·d－1疼痛评分14 d 23 d 30 d正常组 —）0.38±0.48 0.38±0.48 0.25±0.43 AA大鼠 — 3.25±1.85＃＃ 3.63±1.86＃＃＃ 3.25±1.56＃＃尼美舒利 10 1.01±0.66＊ 1.89±1.36＊ 1.38±1.41 100 1.75±0.97 2.25±1.56 2.13±1.62 X浸膏 200 1.00±0.71 2.00±1.73 2.00±1.73 400 1.88±0.78 2.50±1.80 2.25±1.98

2.3 对多发性关节炎指数的影响 致炎后14 d，除了正常组之外的其他各组大鼠开始出现全身症状，表现为未注射佐剂的其余3个肢体关节红肿、变形，耳部及尾部结节，行走不便。X浸膏200 mg·kg－1·d－1用药14 d后，可抑制AA大鼠全身继发性关节病变（表3）。

表3 X浸膏对AA大鼠多发性关节炎指数的影响（±s，n＝10）

表3 X浸膏对AA大鼠多发性关节炎指数的影响（±s，n＝10）

与AA大鼠模型组比较，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

分组 剂量（mg·kg－1·d－1多发性关节炎指数14 d 23 d 30 d正常组 —）0 0 0 AA大鼠 — 6.88±3.75 8.00±3.81 6.38±3.16尼美舒利 10 2.38±1.22＊＊ 3.88±1.76＊ 3.63±2.12＊100 4.25±2.59 6.38±3.12 5.50±2.69 X浸膏 200 3.00±1.73＊ 5.00±1.94 4.25±2.54 400 4.13±2.62 6.00±2.69 5.88±2.09

3 讨论

以弗氏完全佐剂诱导的大鼠AA模型，是一种筛选和研究治疗RA药物常用的模型之一，利用该模型对治疗RA药物的研究有诸多文献报道［3～7］，其继发性反应期是免疫功能紊乱所造成的免疫性炎症反应。本实验观察到AA大鼠在致炎d14继发侧出现肿胀、屈关节疼痛评分升高及多发性全身关节病变，证明AA大鼠具有与RA相似的疼痛、踩关节肿胀以及活动受限制等反应。给药14 d后，X浸膏200 mg·kg－1·d－1剂量组可减轻 AA大鼠的足肿胀度、对AA大鼠关节疼痛明显缓解、抑制AA大鼠全身继发性关节病变，其他剂量组作用不明显。

侗族传统抗风湿药是由茜草、杜仲藤、牛膝、三角枫、乌蔹莓（母猪藤）、山栀茶等6味中药配伍而成。茜草有凉血止血、化瘀通经之效，临床治月经闭塞、恶露不下、跌打损伤、风湿痹痛、痈疽肿毒等［8］。杜仲藤具有祛风活络，强筋壮骨等功效；主治风湿痹痛，腰肌劳损，腰腿痛，跌打损伤，外伤出血等［9］。牛膝具有活血通经、补肝肾、强筋骨；共奏清热祛湿、活血通络、理气止痛之功效［10］。乌蔹莓性味苦、酸、寒，无毒。有清热、利湿、解毒消肿，可用于治疗风湿性膝关节疼［11］。三角枫、山栀茶为贵州省黔东南州少数民族地区常用的中药，将上述6种中药配伍应用，发挥了各个药物及相互的协同作用，为RA的治疗提供一种方法和思路。侗族传统抗风湿药，通过临床67例的实际应用，取得了较好的治疗效果。本实验的研究，为该药在今后的研究和开发奠定了良好的基础。至于该药的作用机制，仍需更进一步的研究和探索。

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Experiment on the Therapeutic Effect of Traditional Anti－Rheumatic Drugs of Dong People on Adjuvant Arthritis Rats

YANG Yan，CHEN Guang－yong，LIU Guang－ming

（People's Hospital of Dali Prefecture，Dali，Yunnan，671000）

Objective：To study the therapeutic effect of traditional anti－rheumatic drugs of Dong people on adjuvant arthritis rats（AA）.Methods：AA rat models were made by intradermal injection in the paw plantar of the AA rats by Freund.The secondary sides of the paw swelling were measured with paw volume measurement，and the pain scores and polyarthritis rating were made.Results：The rats，administrated 2000 mg·kg－1·d－1group with the anti－rheumatic drugs，began to lower the secondary side of their paw swelling，joint pain score and polyarthritis index（P＜0.05）to varying degrees at 14 days.Conclusion：The traditional anti－rheumatic drug of Dong people has a significant anti－inflammatory treatment on the adjuvant arthritis rats.

traditional anti－rheumatic drugs；adjuvant arthritis rats；Freund；anti－inflammatory

R258

A

1007－2349（2012）05－0052－02

云南省卫生厅科研基金，项目编号：99Q049。

杨艳（1973～），女，云南大理人，本科，药师，主要从事中药的研究.

△通讯作者：陈光勇（1974～），男（侗族），贵州剑河人，副教授，硕士生导师，主要从事药物化学的研究，Emil：chengy997＠sina.com.

2012－03－01）

·名医专家经验·