张继朋，胡晓璐，李高峰，陈瑞彬

(昆明医学院第三附属医院，云南省肿瘤医院胸外科，昆明650118)

肺癌的发病率和致死率已跃居各项肿瘤之首，严重危害人类的健康。化疗在局部晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者的治疗中起至关重要的作用，但受药物的耐药性限制［1］。β微管蛋白-Ⅲ是近年来发现的耐药蛋白，相关研究表明，其表达高低与紫杉醇的疗效有一定关系［2］。该项研究采用免疫组化法检测63例NSCLC患者的β微管蛋白-Ⅲ表达水平，探讨其与紫杉醇疗效关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取云南省肿瘤医院胸外科2010年6月至2011年6月收治的63例不能手术，接受以紫杉醇为主化疗的Ⅲa期以上的NSCLC患者。男37例，女26例，男女比例1.4∶1，平均年龄61岁。鳞癌29例，腺癌34例。分化程度:高分化19例，中-低分化44例。KPS评分≥80分。标本足够进行免疫组化检测(标本来源纤维支气管镜、淋巴结活检、CT引导下穿刺活检)。以肺大泡，肺隔离症等11例患者作为对照组。入院时完成脑MRI、胸部CT、腹部CT、骨单光子发射型计算机断层显像(SPECT)，常规检查心、肺、肝、肾等功能，以明确临床分期。化疗采用TP方案:紫杉醇175 mg/m2第1天，顺铂50 mg/m2第1～3天。每4周为1个疗程，共治疗4个疗程。

1.2 试剂和免疫组化染色方法 一抗兔抗人β微管蛋白-Ⅲ购自美国Cell Signal公司，SP免疫组织化学试剂盒购于福州迈新有限公司。采用免疫组化SP法检测β微管蛋白-Ⅲ在组织中的表达，严格按照试剂盒操作规程进行。

1.3 染色结果判定 以病理科两位副主任以上医师进行双盲法阅片，β微管蛋白-Ⅲ蛋白的表达位于细胞胞质内(包括核周)，出现清晰黄色颗粒着色为阳性细胞。根据阳性肿瘤细胞所占比例分级:阳性细胞数＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分;再按染色强度打分:无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;两项得分相乘，并取其平均值。按照分数分为4个等级0～1分为(－)，2～4分为(+)，5～8分为(++)，9分以上为(+++)，(+)以上为阳性表达［3］。

1.4 疗效评价方法 按照WHO实体瘤标准评定疗效分为完全缓解、部分缓解、疾病稳定、疾病进展。以完全缓解+部分缓解为有效。

1.5 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件包对数据进行分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 β微管蛋白-Ⅲ在正常肺组织和肺癌组织中的表达 在63例NSCLC患者中 β微管蛋白-Ⅲ在NSCLC中阳性表达率65.08%(41/63)，高于对照组的阳性表达率27.27%(3/11)，差异有统计学意义(χ2=5.553，P＜0.05)。

2.2 β微管蛋白-Ⅲ的表达与化疗疗效之间的关系63例患者均顺利完成治疗，完全缓解为12例，部分缓解为31例，有效率为68.25%(43/63)。β微管蛋白-Ⅲ中、低表达组完全缓解10例，部分缓解28例，有效率为86.38%(38/44)，高表达组完全缓解2例，部分缓解3例，效率为26.31%(5/19)，差异有统计学意义(χ2=18.909，P＜0.05)。

2.3 β微管蛋白-Ⅲ的表达与临床特征之间的关系β微管蛋白-Ⅲ表达与患者性别、是否吸烟及病理类型无明显相关性(P＞0.05)。β微管蛋白-Ⅲ表达阳性率中-低分化者高于高分化者，差异有统计学意义(P＜0.05)(表1)。

表1 β微管蛋白-Ⅲ的表达与临床特征之间的关系 ［例(%)］

3 讨论

β微管蛋白是构成细胞骨架的主要成分之一，可在正常组织表达，如睾丸组织，也可在肺癌、前列腺癌等组织中表达，在有丝分裂、细胞器组成与运输及信号转导等方面发挥重要作用［4-5］。β微管蛋白-Ⅲ是其中一个亚型，Kavallaris等［6］研究NSCLC的A549-T12、A549-T24、A549等3种细胞对紫杉醇的耐药性，得出前两者的耐药性相当于第三者的十余倍，经反转录-聚合酶链反应分析得出β微管蛋白-Ⅲ在前两者中的表达远高于在第三者中的表达，由此推测，β微管蛋白-Ⅲ是紫杉醇耐药的主要因素。Verdier Pinard等［7］采用电点聚焦和质谱仪等方法联合检测耐紫杉醇细胞株的β微管蛋白，发现在6种型β微管蛋白只有β微管蛋白-Ⅲ表达增高，推测它才是微管作用药物耐药的唯一标志物表明，β微管蛋白-Ⅲ在NSCLC患者中的表达与紫杉醇的疗效有很大关系。

紫杉醇是新型抗微管药物，被广泛应用于肺癌、乳腺癌、卵巢癌的治疗中。作用途径是紫杉醇与微管蛋白N端第31位氨基酸和第217～231位氨基酸结合，使微管蛋白呈聚合状态，维管束与微管组织中心丧失相互连接，于G2/M期阻断细胞周期，有丝分裂异常或停止，使癌细胞无法分裂而死亡［8-9］。

该项试验研究表明，β微管蛋白-Ⅲ水平与肿瘤细胞对紫杉类化疗药物的敏感性呈负相关，β微管蛋白-Ⅲ阳性表达与分化程度有关，分化程度越低，阳性表达率越高，其表达高低与性别、吸烟与否及病理分型无明显相关性，结果与国内外相关报道类似。Seve等［3］应用免疫组织化学方法检测了91例NSCLC组织β微管蛋白-Ⅲ表达水平，其中47例采用紫杉醇相关化疗方案，发现β微管蛋白-Ⅲ高表达组紫杉醇化疗有效率远低于低表达组(12.5%vs 61.9%)，无进展生存期分别为105 d和335 d，总生存期分别为206 d和525 d。杨俊全等［10］采用免疫组化法检测75例Ⅳ期NSCLC患者，均采用含有紫杉醇药物的化疗方案，β微管蛋白-Ⅲ阳性表达率为58.7%，患者性别、年龄及组织类型与其表达高低无关。β微管蛋白-Ⅲ高表达患者紫杉类化疗有效率低于低表达组(25.0%vs 48.9%)，证实高表达NSCLC患者对紫杉类药物耐药且预后不良。上述研究说明β微管蛋白-Ⅲ表达高低与紫杉醇耐药有一定的关系。

综上所述，β微管蛋白-Ⅲ表达的高低与紫杉醇的疗效有一定的关系，为临床医师的选药提供了一定的依据，也有益于化疗疗效的判断。

［1］ Paredes LA，Blanco GC，Elizondo EM，et al.Expression of proteins associated with multidrug resistance and resistance to chemotherapy in lung cancer［J］.Arch Bronconeumol，2007，43(9):479-480.

［2］ Koh Y，Jang B，Han SW，et al.Expression of classⅢbeta-tubulin correlates with unfavorable survival outcome in patients with resected non-small cell lung cancer［J］.Thorac Oncol，2010，5(3): 320-325.

［3］ Seve P，Mackey J，Isaac S，et al.ClassⅢbeta-tubulin expression in tumor ceils predict response and outcome in patients with non.small cell lung cancer receiving paclitaxel［J］.Mol Cancer Ther，2005，4(12):2001-2007.

［4］ Nogales E，Wolf SG，Downing KH.Structure of the alpha beta tubulin dimer by electron crystallography［J］.Nature，1998，391 (6663):199-203.

［5］ Dutcher SK.The tubulin fratemity:alphatoeta［J］.Curr Opin Cell Biol，2001，13(1):49-54.

［6］ Kavallaris M，Kuo DY，Burkhart CA，et al.Taxol-resistant epithelial ovarian tumors are associated with altered expression of specific beta-tubulin isotypes［J］.J Clin Invest，1997，100(5):1282-1293.

［7］ Verdier Pinard P，Wang F，Martello L，et al.Analysis of tubulin isotypes and mutations from taxol-resistant cells by combined isoelectrofocusing and mass spectrometry［J］.Biochemistry，2003，42 (18):5349-5357.

［8］ Rao S，Krauss NE，Heerding JM，et al.3-(pazidobenzamido)taxol photo-labels the N-terminal 31 aminoacids of β-tubulin［J］.J Biol Chem，1994，269(5):3132-3134.

［9］ Miller ML，Ojima I.Chemistry and chemical biology of taxane anticancer agents［J］.Chem Rec，2001，1(3):195-211.

［10］ 杨俊全，高献书，刘宏侠，等.Ⅳ期非小细胞肺癌组织βⅢ-tubulin表达与紫杉类化疗耐药相关［J］.第四军医大学学报，2008，29(10):930-932.