严 犇,刘 康,刘保林,黄 芳

中国药科大学中药药理实验室，南京 211198

知母为百合科植物知母（Anemarrhena asphodeloides Bunge.）的干燥根茎，具有抗菌解热、降糖、降脂、抑制血小板聚集等作用。知母多酚（total phenol of Anemarrhena asphodeloides，TPAA）为其主要活性组分。体内研究发现[1-2]，知母多酚能显著降低糖尿病动物的血糖。本文通过知母多酚对内皮保护作用的研究，探讨其改善糖尿病心血管并发症的作用。

1 实验材料

1.1 药物及试剂

知母购自安徽亳州药材市场，经南京中医药大学生药教研室吴启南副教授鉴定确认。知母用10倍量水煎煮2次，每次1h，放冷，过滤，浓缩至1 g· mL-1，加乙醇至含醇70%，过滤，回收乙醇，得流浸膏，再加水稀释至0.5 g·mL-1、调pH值为3，正丁醇1/3体积萃取3次，得正丁醇层，调pH值为7，以水1/3体积萃取3次，得水层，调pH值为3，正丁醇1/ 3体积萃取3次，回收正丁醇，得知母多酚，收率为2%。以芒果苷（苏州思源天然产物研发有限公司赠送，纯度99.5%以上）为对照，酒石酸亚铁反应比色法测定总酚含量为80%。经HPLC法测得，多酚中主要成分为芒果苷和新芒果苷，见图1。

牛血清白蛋白（BSA，南京生兴生物技术有限公司，批号：8C248C24）；棕榈酸（palmitic acid，PA），用无水乙醇溶解、10%BSA稀释成相应浓度；胰岛素注射液 （江苏万邦生化医药股份有限公司，批号：1103240）；重酒石酸去甲肾上腺素注射液（NE，天津金耀氨基酸有限公司）；乙酰胆碱（Ach）、水杨酸钠、D-葡萄糖、果糖、叠氮钠均为分析纯。

图1 知母多酚HPLC测定结果峰13为芒果苷，峰7为新芒果苷

人脐静脉血管内皮细胞株（HUVEC），购于南京凯基生物有限公司。胎牛血清（Fetal bovine serum，FBS）、DMEM培养基，Gibco公司产品。ELISA试剂盒，进口分装，南京迪兆生物科技有限公司提供。……