RT-PCR技术检测VFMRNA在妊娠期糖尿病中的应用
2012-01-28季泽叶
季泽叶
本研究对妊娠晚期的妊娠期糖尿病孕妇及糖耐量正常孕妇大网膜组织中VFmRNA表达变化进行检测,旨在为探索GDM病因及VF的分子学作用机制提供进一步研究的基础。
1 临床资料
1.1 一般资料
选择我院产科行产前检查并行剖宫产术终止妊娠的妊娠36~40周、单胎、初产妇共200例,合并有T1DM或T2DM、妊娠期高血压疾病、肝肾疾病、甲状腺疾病和多囊卵巢综合征者除外。孕妇均在孕24~28周行50 g葡萄糖负荷试验,服糖后1h血糖水平>7.78mmol/L者为阳性,阳性者进一步行口服葡萄糖耐量试验,依据美国糖尿病学会GDM标准进行诊断。若OGTY各时间点的结果中两项或两项以上高于正常诊断值为GDM(GDM组90例);50g葡萄糖负荷试验及 OGTI结果均正常者诊断为NGT(NGT组110例)。两组孕妇年龄、孕周等比较,差异均无统计学意义(P<0.05)。
1.2 方法
1.2.1 标本采集及空腹血糖、空腹胰岛素、血脂水平测定:晨起抽取空腹肘静脉血 5ml,1h内分离血清,-80℃保存待测。血浆葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FBG)水平。试剂盒及全自动生化分析仪由瑞士罗氏公司提供;化学发光免疫分析法测定空腹胰岛素(FINS)水平,试剂盒及全自动生化分析仪由美国DPC公司提供;酶法测定总胆固醇(Tc)及甘油三酯(TG)水平,试剂盒及全自动生化分析仪由宁波亚太生物技术有限公司提供。实验按说明书步骤进行。采用稳态模型(HOMA)计算IR指数(HOMA—IR),计算方法为FBG×FINS/22.5。
1.2.2 半定量 RT—PCR技术检测大网膜 vFmRNA表达
采用TRIzol(美国MRC公司产品)提取总RNA。参照RT—PCR试剂盒(日本TaKaRa公司产品)进行逆转录反应.以肌动蛋白(13-actin)为内参照,预扩增片段为589bp。……
