褚新勇

（山东省滨州市滨城区里则街道办事处，滨州 256600）

1 发病情况

2010年8月，滨州市某育肥猪场部分圈舍育肥猪连续出现死亡现象，原因不明，经几天治疗，效果较差。据该养殖场场主李某介绍，2010年8月初，该场陆续从外地购进30 kg左右仔猪236头，分别放在近30个圈舍内饲养，从8月23日开始，有1个圈舍的猪开始发病，该场饲养员怀疑是血虫病，就用血虫康等药物治疗，但效果甚微，继而有5个圈舍出现发病情况。发病3～5 d后开始出现死亡。截止2010年9月1日共发病87头，死亡32头。根据发病情况、临床症状、剖检病变和实验室检查结果，确诊为猪瘟与猪链球菌病混合感染。

2 症状

病猪精神沉郁，常卧一处或闭目嗜睡，行动缓慢，头尾下垂、拱背、喜欢堆在一起、食欲减少或停食，喜饮水，体温升至41℃以上，持续不退；眼睛分泌物增多，眼结膜潮红，眼睑水肿；下腹部、耳根、嘴唇等处出现紫红色斑点；病初排粪困难，不久出现腹泻，粪便呈灰黄色；公猪包皮内积有尿液，挤压流出灰白色恶臭液体；第5d病猪开始出现关节肿胀，跛行，站立不稳；呼吸快而浅表，有浆液性粘液性鼻汁流出，继而有的出现神经症状，运动失调、转圈和空嚼，仰卧于地，四肢游泳状划动。

3 病理变化

剖检肉眼可见小血管变性引起的广泛性出血、水肿、变性和坏死。耳根、下腹部、四肢内侧、皮下脂肪和肌肉等部位有出血点；支气管、颈部、肠系膜和腹股沟等淋巴结肿呈多汁和充血或出血，外表紫黑色，切面呈大理石样变；肾脏色泽变淡，皮质有出血点；脾肿大，边缘可见黑红色的坏死呈踞齿状；肝充血；膀胱粘膜有出血点；肺出血；咽部粘膜及会厌软骨有大小不一的出血点；脑膜出血和充血，脑脊液增多和浑浊，脑实质化脓，关节肿胀，充血，滑液增多，周围组织有多发性化脓灶。

根据发病情况，临床症状和病理剖检变化初步诊断为猪瘟继发猪链球菌感染。

4 实验室诊断

4.1 涂片镜检

取病死猪的心血、肝脏、脾脏涂片，将抹片置于空气中自然干燥；火焰固定，革兰氏染色，镜检观察。可见成双和链状排列的革兰氏阳性球菌，具有链球菌的形态特征。

4.2 病原分离鉴定

病料采自发病猪场病死猪，并将其中的病死猪6头和血清10份送山东省畜牧兽医职业学院动物预防医学实验室进行诊断。

4.2.1 分离培养形态 取纯培养物，分别将其接种于各种球菌鉴定生化管内，37℃培养24h，观察记录变化情况。在普通营养琼脂平板上，生长不良。接种在全血琼脂平板和血清琼脂平板上，菌落小的呈无色透明，大的略呈淡灰色。菌落出现明显透明的溶血环。血清肉汤培养24h呈均匀浑浊，管底有少量絮状沉淀，不形成菌膜或菌环，继续培养1 d后，菌体下沉，肉汤变清朗。具有链球菌的培养特性。

4.2.2 培养物涂片染色 培养勿涂片革兰氏染色镜检，其形态特征同4.2.1。

4.2.3 运动性观察 纯培养物穿刺血清半固体培养基，置37℃恒温箱中培养24 h，该菌沿穿刺线生长，说明本菌无鞭毛，不能运动。

4.2.4 动物接种试验 无菌操作剪取小块肝、脾病料，置无菌研钵中研磨，用生理盐水10倍稀释，纱布过滤备用。同时将分离纯化的菌株接种于血清肉汤培养基中，置37℃恒温箱中培养24 h备用。取健康小白鼠12只，随机分为试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和对照组，每组4只。试验Ⅰ组每只腹腔注射组织悬液0.2 ml；试验Ⅱ组每只腹腔注射含菌肉汤0.2 ml，对照组腹腔注射同剂量的无菌血清肉汤。观察小白鼠发病死亡情况。将死亡小白鼠心血、肝组织接种于血液培养基，37℃恒温箱中培养24 h后，涂片、革兰氏染色镜检，观察是否为接种菌株。试验组8只小白鼠于24～48 h死亡。剖检后取肝、脾涂片，革兰氏染色镜检，均见到与死猪病料涂片一致的革兰氏阳性、成对或呈链状排列的链球菌。

4.2.5 荧光抗体试验（FA）结果 取病猪的扁桃体、淋巴结、脾触片，置室温干燥，滴加冷丙酮数滴，置-20℃定15～20 min。用磷酸盐缓冲液（PBS）洗，阴干。滴加标记荧光抗体，置37℃饱和湿度箱盒内作用30 min。用pH7.2的PBS漂洗3次，每次5～10 min。干后滴加甘油缓冲液，加盖玻片封闭，用荧光显微镜检查。可见细胞胞浆内有弥漫性、絮状或点状的亮黄绿色荧光，证明有猪瘟病毒存在。健康猪组织触片荧光抗体染色镜检无荧光出现。

4.2.6 兔体交互免疫试验结果 将健康家兔4只，随机分为实验组和对照组，每组2只；试验前3 d测温，3次/d，间隔8h，体温应正常。

取新鲜病死猪的脾组织1∶10灭菌生理盐水悬液，离心取上清液，加青链霉素、链霉素各1 000 U/ml处理后，4℃过夜，试验组每只家兔肌肉注射脾组织悬液上清液5ml，继续测温，每隔6h 1次，连续3 d。

观察7 d后再与对照兔分别静脉注射1∶20猪瘟兔化弱毒疫苗，接种后24 h开始测温，6 h 1次，连测3 d，记录每只兔的体温变化情况。选择体重1.5 kg左右的试验兔4只，接种正常脾组织病料悬液的家兔体温均升到41～41.5℃，并持续48 h。而对照组体温不升高。试验结果证明，接种的脾组织病样中含有猪瘟病毒。

4.2.7 正向间接血凝试验（IHA）结果 其操作方法和判定标准，均按《猪瘟正向间接血凝诊断试剂使用说明书》进行。10份待捡血清检结果，7份抗体水平在1∶8以下，说明该猪群猪抗体已不能抵抗猪瘟病毒的侵袭。2份抗体水平在1∶256，1份抗体水平在1∶1 024。猪瘟抗体效价离散度较大，说明有猪瘟野毒（强毒）感染。

3 治疗

3.1 药敏试验结果

分离菌株对头孢曲松、左氧氟沙星、丁胺卡那霉素高敏；对青霉素G、氨苄青霉素、氟苯尼考、安普霉素中度敏；对恩诺沙星、环丙沙星、痢菌净、庆大霉素等产生了广泛的耐药。

3.2 临床治疗试验结果

全群用猪瘟兔化弱毒苗紧急免疫接种，猪瘟疫苗5头份/只；病猪肌肉注射头孢曲松钠制剂，2次/d，连用4～5d。全群用左氧氟沙星拌料饲喂。并注意消毒和加强饲养管理。经上述处理，疫情在第6 d已经得到有效控制。

4 讨论

（1）通过临床诊断与实验室诊断结果表明，本次疫病为猪瘟病毒和链球菌病混合感染。本次疫病的发生，主要是由于引进生猪时未进行严格检疫，将外疫带入，因此提示养殖户从外地引进牲畜时，必须从非疫区引进，且具备产地检疫证明，在与本地畜群混群前应先隔离饲养1个月，确认健康后方可混群，同时要按照免疫程序，进行疫病的免疫接种。有条件的猪场应坚持自繁自养。

（2）该病发生后应首先对全群紧急接种猪瘟兔化弱毒苗。对于混合感染细菌的，最好通过药敏试验来选择敏感药物进行治疗。同时隔离病猪，对病死猪一律采取焚烧或深埋处理，对污染的栏舍、地面通道、用具等用火碱水、菌毒杀严格消毒，杀死病原微生物。

（3）猪瘟与链球菌混合感染多表现为急性，发病快、病程短、死亡率高，一旦发病，将带来很大的经济损失。因此，规模化猪场必须建立健全兽医卫生防疫制度，严格控制、监督执行。预防接种不是万能的，一定要结合搞好环境卫生、严格消毒、药物预防等综合防治措施，才能避免疫病的侵入。