郑元正，谢建亮，孙鹂，王佩飞

（1.温州医学院附属乐清医院 外科，浙江 温州 325600；2.杭州师范大学医学院 中心实验室，浙江 杭州 310036）

有研究表明，细胞周期调控异常与细胞癌变密切相关，细胞周期的关键是G1期的启动，因此对肿瘤的研究多集中在G1～S期[1]。S期激酶相关蛋白2（S-phasekinaseassociated protein 2，Skp2）属于F-box蛋白家族中重要的一员，是细胞周期G1/S期的重要调控因子，通过泛素化参与细胞周期调控，与肿瘤发生、发展和预后密切相关[2-3]。但Skp2与Cyclin D1的表达在胃癌中的关系目前尚不清楚，本研究采用RT-qPCR检测胃癌组织和正常胃组织中的Skp2、Cyclin D1，探讨两者在胃癌组织和正常胃组织中的表达及其临床意义。

1 资料和方法

1.1 一般资料 标本来源于温州医学院附属乐清医院2008年9月至2010年10月间内镜室胃镜活检的正常胃黏膜组织及经外科手术切除的胃癌组织标本，均经病理证实。正常胃黏膜组织20例，其中男13例，女7例，年龄31～69岁，平均（50.3±4.6）岁。胃癌组织35例，其中男24例，女11例，年龄30～76岁，平均（56.5±6.2）岁；其中早期胃癌15例，进展期胃癌20例；高中分化20例，低分化15例；肿瘤未穿透浆膜（T1～T2）22例，穿透浆膜（T3～T4）13例；有淋巴结转移16例，无淋巴结转移19例。

1.2 方法 用RT-qPCR法检测Skp2与Cyclin D1在正常胃组织、胃癌组织中的表达情况。RNA抽提：每50 mg组织加入1 mL Trizol（购自Gibco公司），按Trizol试剂说明书提取总RNA，测定OD280/260。RT-qPCR所用引物由上海英骏生物技术有限公司合成，Oligo dT（购自Takara公司）进行逆转录。RT-qPCR检测反应体系包括：1μ L RT产物，1×SYBR Green I Mastermix（购自Takara公司），0.5μmol/L引物。GAPDH为内参。反应条件为：95 ℃ 10 min后，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，40个循环。所有样品做3个复孔。记录每个反应管中的荧光信号到达所设定的域值时所经历的循环数（Ct值）。……