氢氯噻嗪分散片中有关物质苯并噻二嗪杂质A的研究

2012-01-20王焕王国振

河北医药 2012年16期

王焕王国振

氢氯噻嗪是噻嗪类利尿剂中用于治疗高血压的最常用药物，用于降压治疗己有数十年的历史。氢氯噻嗪原料在合成过程中带入苯并噻二嗪杂质A杂质，苯并噻二嗪杂质A的多少直接影响原料质量，超过0.1%易吸潮，制得制剂稳定性差，不良反应发生率高，因此有必要控制制剂中有关物质苯并噻二嗪杂质A含量。而分散片具有崩解速度快，药效作用迅速、药物生物利用度好等特点。本实验是对氢氯噻嗪分散片有关物质苯并噻二嗪杂质A进行研究。

1 材料与方法

1.1 仪器与药品 Agilent 1100高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司);TU-1901型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限公司);JA1203N型分析天平(上海精密科学仪器有限公司);PHS-25型酸度计(上海雷磁仪器厂)。氢氯噻嗪分散片规格:25 mg/片(河北龙海药业有限公司实验室，批号:090803、090804、090805);氢氯噻嗪对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100309-200702);苯并噻二嗪杂质A对照品(USP，批号:I0F027)。

1.2 色谱条件与系统适用性实验色谱柱为ShimadzuVP-ODS(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，氰基键合硅胶为填充剂，以 pH 值3.0磷酸盐缓冲液-甲醇-乙腈(60∶20∶20)为流动相，检测波长为 273 nm［1］，流速 1.0 ml/min，进样量10 μl。理论板数按氢氯噻嗪峰计算不低于5 000，氢氯噻嗪与有关物质苯并噻二嗪杂质A峰之间的分离度符合规定。

1.3 专属性试验

1.3.1 供试品溶液:取本品10片，精密称定，研细，精密量取适量(约相当于氢氯噻嗪25 mg)，置100 ml量瓶中，加酸性水溶液30 ml，超声溶解，加甲醇60 ml，混匀，超声助溶5分钟，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液15 ml，置100 ml量瓶中，用甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

1.3.2 辅料供试品溶液的配制:取相当于一片制剂重量的全辅料，置50 ml量瓶中，加水适量，超声并稀释至刻度。分别取供试品溶液和辅料供试品溶液20 ml3份，分别加入1 mol/L的盐酸5 ml、1 mol/L的氢氧化钠溶液 5 ml、过氧化氢 5 ml，水浴30 min，放冷后过滤，取续滤液测定。第4份水浴2 h，第5份置4 500lx光强下放置2 d，过滤，取续滤液测定。

1.4 线性范围和定量限精密称取苯并噻二嗪杂质A对照品10 mg，置200 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。0.15、0.3、0.6、1.2、2.4 ml，置 100 ml量瓶中，加甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀释至刻度，摇匀，分别精密量取10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度 C(μg/ml)为横坐标，主峰峰面积为纵坐标，作线性回归。苯并噻二嗪杂质 A 回归方程为 Y=170.66C －8.904，r=0.9997。

1.5 加样回收率测定取苯并噻二嗪杂质A对照品约10 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解，甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为苯并噻二嗪杂质A储备液。按本品制剂处方，配制模拟空白辅料，精密称取氢氯噻嗪100%一份，再按处方量精密称取相应量的辅料，置100 ml量瓶中，加酸性水溶液30 ml，超声溶解，加甲醇60 ml，混匀，超声助溶5 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液15 ml，置100 ml量瓶中，用甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得供试品储备液。分别精密量取苯并噻二嗪杂质 A储备液0.05、0.1 ml和0.15 ml，各3份，分别置10 ml量瓶中，加供试品储备溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，分别精密量取续滤液10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算苯并噻二嗪杂质A的浓度，并计算回收率。

1.6 重复性试验照有关物质测定项下的方法，配制对照品溶液，重复测定5次。

1.7 样品溶液的稳定性照有关物质测定项下的方法，配制对照品溶液，分别在 0、2、4、8、12 h 测定。

1.8 有关物质确定取上述供试品溶液，作为供试品溶液。精密称取苯并噻二嗪杂质A对照品10 mg，置200 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(1)。精密量取对照品溶液(1)0.6 ml，置100 ml量瓶中，加甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(2)。照含量测定项下的方法，精密量取含量测定项下的氢氯噻嗪对照品溶液(0.1 mg/ml)5 ml，上述杂质对照品溶液(1)0.6 ml，置 100 ml量瓶中，加甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀释至刻度，摇匀，取10 μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使杂质峰能准确积分，并使苯并噻二嗪杂质A峰与主成分氢氯噻嗪峰之间的分离度符合规定。再精密量取对照品溶液(2)与供试品溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至氢氯噻嗪主峰保留时间的1.5倍，按外标法以峰面积计算，有关物质应符合下列要求:相对于氢氯噻嗪，苯并噻二嗪杂质A的量应不超过0.1%。

2 结果

2.1 专属性试验在选定的色谱条件下，辅料对光、热较为稳定;在酸、碱、氧化条件下有所降解，但保留时间均在苯并噻二嗪杂质A前，不影响氢氯噻嗪杂质测定。氢氯噻嗪对光较为稳定;在热的作用下，氢氯噻嗪杂质增加;氧化条件下，降解增多，但产物均在2 min左右，不影响氢氯噻嗪杂质测定;在碱的作用下略有降解，杂质增大，并产生保留时间3.8 min的的杂质;在酸的作用下略有降解，杂质增大，并产生保留时间7 min左右的杂质，均不影响氢氯噻嗪与厄贝沙坦杂质的测定。在选定的色谱条件下，辅料对有关物质测定没有干扰，降解产物与主成分可达基线分离，分离专属性良好。

2.2 线性范围和定量限在0.076 ～1.222 μg/ml，苯并噻二嗪杂质A的浓度与峰面积线性关系良好。上述系列浓度溶液中1号溶液进样10 μl，色谱峰的信噪比约为10，因此可确定苯并噻二嗪杂质A的定量限为0.76 ng。见表1。