刘丹丹，姜 悦，刘 奔，刘纯青，魏 巍，张艳丽，>赵心宇，赵宝霞，孟秀香

(1.大连医科大学 诊断学实验中心，辽宁 大连116044；2.黑龙江省双鸭山市疾控中心，黑龙江 双鸭山155100；3.大连医科大学 检验医学院，辽宁 大连116044；4.山东省济南市第五人民医院 检验科，山东 济南250022)

Bmi-1基因(B-cell-specific Moloney murine leukemia virus insertion site 1)是多梳基因(polycomb group genes，PcG)家族中重要成员之一[1]。Bmi-1基因决定着某些肿瘤干细胞自我更新能力，如白血病干细胞[2]、神经肿瘤干细胞[3]和乳腺癌干细胞[4]等。很多临床研究发现Bmi-1基因与多种肿瘤关系密切，在神经胶质瘤、乳腺癌、肝癌、直肠癌及胃癌等中均发现Bmi-1表达较正常组织增高，且这种表达的增高与肿瘤组织特性(如癌组织大小、分期分级、病程、转移程度等)的相关性研究表明，Bmi-1与肿瘤的恶性程度、侵袭、转移及预后关系密切[5-7]。本文旨在研究Bmi-1 siRNA沉默Hela细胞中Bmi-1表达对Hela细胞增殖能力的影响，并探讨其机制。

1 材料和方法

1.1 siRNA重组质粒的构建与转染

根据GENEBANK中的Bmi-1 mRNA Sequence NM_005180，设计4条Bmi-1 siRNA序列和一条随机序列的阴性对照(表1)。将合成siRNA小片段与进行BamHI+HindIII双酶切的质粒pGenesil-2进行表达载体连接，获得连接有各siRNA小片段的重组质粒。利用FuGENE®HD 试剂(Roche公司)将重组质粒分别转染入Hela细胞中，转染siRNA干扰质粒的Hela细胞分别命名为Hela-S1、Hela-S2、Hela-S3、Hela-S4细胞，转染随机系列阴性对照质粒的Hela细胞命名为Hela-V细胞，未转染的Hela细胞命名为Hela-W细胞。将细胞置于37 ℃、5% CO2、饱和湿度孵箱中培养。质粒pGensil-1(由武汉晶赛公司提供)含有EGFP基因能表达荧光蛋白，用于荧光显微镜观察转染效率。

表1 Bmi-1 siRNA序列Tab 1 The siRNA target sequence of Bmi-1 gene

1.2 Bmi-1mRNA水平检测

采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Bmi-1 mRNA。Bmi-1基因上游引物：5′-TCATCCTTCTGCTGATGCTG-3′，Bmi-1基因下游引物：5′-GCATCACAGTCATTGCTGCT-3′，扩增片断长度为221 bp。以……