孙佑赫，周开艳，熊智

(西南林业大学林学院，云南昆明650224)

昆虫肠道内寄居着大量的细菌，正常的肠道细菌是昆虫寄主生长发育、繁殖所必须的。近年来随着胃肠道微生态理论研究的逐步深入，对昆虫肠道菌群结构和产酶菌株的研究，已成为新的研究热点。目前，对白蚁、家蚕［1-3］等肠道菌群的研究报道较多，同时亦发现各类产酶菌株的存在，并对酶学性质进行了研究［4-5］。脂肪酶(Lipase，EC 3.1.1.3)是一类在油水界面催化天然底物油脂(甘油三脂)降解为甘油和游离脂肪酸的酶，广泛存在于动物、植物和微生物中［6］。微生物脂肪酶比动植物脂肪酶作用的温度和pH范围宽，易获得较高纯度酶制剂，适合于工业上大规模生产［7］。以往，研究者多从土壤、淤泥中采集样品筛选产酶微生物，本实验以思茅地区严重危害各类松树的思茅松毛虫为实验材料，分离其肠道内产脂肪酶菌株。通过纯培养和16S rDNA序列分析，对产酶菌株进行初步鉴定和酶学性质研究，为开发新的具有应用价值的资源微生物增加新的认识。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 培养基①分离培养基(g/L):牛肉膏5，蛋白胨10，NaCl 5，琼脂18，pH 7.0～7.2;②脂肪酶筛选培养基(g/L):牛肉膏5，蛋白胨10，橄榄油10，琼脂15，pH 7.0～7.2;③种子培养基(g/L):同分离培养基，不加琼脂;④产酶发酵培养基［8-9］(g/L):牛肉膏5，蛋白胨5，橄榄油10，KH2PO41，MgSO4·7H2O 0.5，(NH4)2SO41，pH 7.0～7.2。

1.1.2 主要试剂和仪器DNA提取试剂盒(天根公司)、2×Power Taq PCR MasterMix(BIOTEKE公司)、通用引物(TaKaRa公司)，其余试剂均为分析纯;PCR仪(Biometra公司，TGRADIENT)，高速离心机(Eppendorf公司)、凝胶成像分析仪(Bio-Rad公司，Gel-Doc XR+);电泳仪、灭菌锅、超净工作台、摇床、培养箱、紫外分光光度计等均为国产仪器。……