王先磊, 谭训刚 张培军 徐永立

(1. 中国科学院 海洋研究所, 实验海洋生物学重点实验室 山东 青岛 266071; 2. 青岛国家海洋科学研究中心, 山东 青岛 266071)

牙鲆RAG2基因的质粒构建和体外原核表达

王先磊1,2, 谭训刚1, 张培军1, 徐永立1

(1. 中国科学院 海洋研究所, 实验海洋生物学重点实验室 山东 青岛 266071; 2. 青岛国家海洋科学研究中心, 山东 青岛 266071)

将牙鲆(Paralichthys olivaceus)RAG2 cDNA序列插入到体外表达质粒pProEXTM HT, 在大肠杆菌(Escherichiacoli) BL-21中进行体外表达, 分析了诱导时间和 IPTG浓度对重组蛋白产生量的影响,确定了最佳诱导条件为：诱导时间为3 h, IPTG诱导浓度0.2 mmol/L。本研究同时对RAG2重组蛋白的可溶性进行确认, 并利用BD TALONTM 金属亲和柱纯化了RAG2蛋白。本研究结果为进一步深入研究RAG2蛋白的生物学功能奠定了良好的基础。

牙鲆(Paralichthys olivaceus); RAG2; 重组; 纯化

重组活化基因2(Recombination activating gene 2,RAG2)在基因序列上与 RAG1基因紧密相连, 对于淋巴细胞的V(D)J重排是必需的。如果缺失了RAG1或者 RAG2基因产物, 淋巴细胞无法发育成熟, 从而在小鼠(Mus musculus)和人体内导致严重的免疫缺陷[1]。

最初关于 RAG2蛋白的功能研究主要集中在哺乳动物、两栖类和鸟类[2-4], 随着鱼类疾病的频繁发生和水产养殖业的发展, 各国学者将目光开始转移到鱼类的 RAG2基因功能研究, 目前虹鳟(Oncorhynchus mykiss)[5-6]、斑马鱼(Denio rerio)[7-8]、红鳍东方豚(Fugu rubripes)[9]、鲫鱼(Carassius auratus)[10]、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)[11]等硬骨鱼类的 RAG2基因已得到克隆, 而软骨鱼的代表物种鲨鱼(Rhizoprionodon lalandii)RAG2基因也得到克隆[12], 其在硬骨鱼类体内 mRNA水平的时空表达情况也进行了分析[13]。研究发现, 目前已知的所有生物的RAG2的基因序列内没有内含子。

牙鲆(Paralichthys olivaceus)是中国北方重要的经济养殖品种, 目前, 病害的频繁发生严重阻碍了牙鲆养殖业的发展。……