于素香，孙玉国，王春艳

(承德医学院，河北承德 067000)

叶酸是机体参与核酸合成的重要生化成分，以往临床上主要用于治疗贫血，自上世纪90年代始用于预防胎儿神经管畸形和先天性心脏病等出生缺陷性疾病，因此叶酸预防出生缺陷的机制及安全性成为研究热点。胎盘作为为胎儿提供营养的特有器官，其细胞增殖状态与胎盘发育及胎儿的存活密切相关。增殖细胞核抗原(PCNA）是DNA聚合酶δ的重要辅助因子，在DNA复制、细胞增殖和细胞周期调控中发挥重要作用[1]。已有关于叶酸在体外对胎鼠神经干细胞增殖影响的研究，但未见叶酸对胎盘细胞增殖状况影响的报道。本研究通过观察叶酸对妊娠大鼠胎盘细胞PCNA表达的影响，探讨叶酸对发育中胎盘细胞的作用及机制，为叶酸预防出生缺陷的科学性研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 小鼠抗大鼠PCNA单克隆抗体、二步法免疫组化检测试剂PV-9005、DAB显色剂，北京中杉金桥生物技术限公司;叶酸，上海生物化学制药厂(批号20090207）。

1.2 实验动物分组、受孕、干预和取材 8-10周龄健康清洁级SD大鼠60只(北京大学医学部动物中心提供，合格证号:SCK京1009-0008），体重210-250g，雌鼠40只，雄鼠20只。雌性大鼠随机分为4组:对照组、大、中、小剂量叶酸组，每组10只。所有大鼠于普通笼具中适应性喂养一周后，按雌雄2:1比例合笼，次晨观察到阴栓者确定为受孕，记为E 0.5d。从受孕之日起，大、中、小剂量叶酸组大鼠分别给予叶酸2mg/kg/d、1mg/kg/d、0.5mg/kg/d灌胃;对照组大鼠给予等容积生理盐水。各组孕鼠于E 13.5d取材，每只孕鼠随机取一个胎盘，Bouins液固定，常规石蜡包埋，连续切片，片厚5μm。……