邹玖明，张爱平，李智山*

(1.襄樊学院附属医院襄阳市中心医院检验科，湖北襄阳441021;2.襄阳市中心医院重症医学科，湖北襄阳441021)

鸡卵黄免疫球蛋白(egg yolk immunoglobulin，IgY)是鸡血液中IgG抗体选择性转移到卵黄中形成的，是卵黄中唯一的免疫球蛋白类。其形成、生物学特性等方面已研究得较清楚，并且作为诊断试剂和防治药物的研究正越来越受到关注。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantS.aureus，MRSA)是导致社区和医院内获得性感染最重要的致病菌之一，在世界范围内广泛流行［1］。其主要耐药机制是由mecA基因编码产生了对β-内酰胺类抗生素低亲和力的青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a，PBP2a)，因此检测PBP2a抗原是鉴定MRSA的一个可靠方法［2］。本研究采用体外诱导方法制备PBP2a蛋白作为抗原免疫海蓝鸡，旨在制备高效价、特异的抗PBP2a鸡卵黄抗体，并建立检测MRSA的乳胶凝集方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 原料24周龄的健康海蓝蛋鸡8只购于湖北宜昌市种鸡厂，6只进行免疫，2只用作阴性对照。

1.1.2 标准菌株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(ATCC706986，MRSA)、甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌(ATCC25923，MSSA)、金黄色葡萄球菌(ATCC25922、ATCC29212、ATCC27853)均为本室保存。

1.1.3 试剂LB培养基(上海生工)、PBS缓冲液(上海生工)、头孢唑肟(英国OXOID)、溶葡萄球菌素(SIGMA)、弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂(SIGMA)、辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡Gig(美国Pierce)、酶标反应板、硝酸纤维素膜(BIORAD)。

1.2 方法

1.2.1 PBP2a蛋白的诱导及制备参照文献［3］方法:取隔夜培养的MRSA 5～10个菌落接种于300 mL液体LB培养基中，加入0.2 g/mL头孢唑肟作为诱导剂，32℃振摇培养18 h后，10 400 r/min离心10 min，50 mmol/L PBS缓冲液洗涤1次，分装试管中，每支终体积为3 mL，然……