陈俊意，朱照静，张如超，杨治国，蒋洪辉，邓才彬，谭丽，黄晓可

(重庆医药高等专科学校重庆医学生物技术研究所/临床医学系，重庆400030)

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)是引起病毒性肝炎的主要病原体［1-5］，由HBV所引起的乙型病毒性肝炎是严重危害我国人民健康的传染病。我国慢性乙肝病毒感染者占全世界的1/4，拉米夫定(lamivudine)和阿德福韦双酯(adefovir dipivoxil)是目前广泛用于治疗慢性乙型肝炎的核苷类似物药物，这2种药物可以在单一治疗或在联合治疗中使用。但由于耐药HBV病毒株的出现，治疗效果常常不能持久。有些患者在治疗中或治疗后观察到肝炎突然发作，可再次检测到HBV DNA，使得乙型病毒性肝炎治疗成功率一直不高［6-10］。临床研究表明，用于临床治疗的核苷(酸)类似物产生的耐药是由于HBV发生了突变，进而导致药物抑制病毒复制的作用明显减弱。因此在新的抗病毒药物投入临床使用之前，对HBV耐药突变体进行筛选，对耐药的分子机制进行研究，变得更加迫切。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病例重庆肿瘤医院40岁男性患者1名，HBsAg阳性、HBeAg阳性，该患者以前未接受抗病毒治疗，入院后用抗病毒核酸类药物治疗。最开始用拉米夫定治疗16周，而后用拉米夫定和阿德福韦混合治疗16周。

1.1.2 血清收集和相关指标测定分别于0、18、22、60和70周收集患者血清。测定丙氨酸氨基转移酶(glutamate-pyruvate transaminase，ALT)及HBV DNA滴度，均利用商业试剂盒按照临床要求测定。直接测序确定HBV基因型。

1.2 方法

血清中HBV DNA提取按照试剂盒说明书(Omega，America)进行，反应体系总体积30 μL，20 mmol/L Mg2+3 μL、2 mmol/L dNTP 3 μL、10×buffer 3 μL、引物3 μL、模板3 μL、Tag酶0.2 U，用去离子水(DH2O)补足体积。……