吴红艳，陈飞，关艳丽，方新，于淼

(辽宁省微生物科学研究院，辽宁朝阳122000)

胆固醇氧化酶(Cholesterol oxidase，CHO)是胆固醇降解代谢过程中的第一个酶。它能够催化胆固醇生成终产物4-胆甾烯-3-酮，同时将脱下的氢与氧气生成H2O2。在临床上胆固醇氧化酶与胆固醇脂酶和过氧化氢酶一起作为血浆总胆固醇含量的检测试剂，用以诊断冠心病、动脉粥样硬化等心脑血管疾病;在食品行业常用它来降低食品中胆固醇含量，制造保健食品;同时，它又是一种新型、高效杀虫剂，对鞘翅目、鳞翅目、双翅目、直翅目、同翅目等害虫都有毒杀作用，尤其对鞘翅目棉铃象甲具有极强的毒杀能力。研究人员已经从好几种微生物中分离到胆固醇氧化酶基因［1］，如甾短杆菌、链霉菌、分枝杆菌和红球菌等。不吸水链霉菌梧州新亚种是由辽宁省微生物科学研究院自行筛选的、具有自主知识产权的新菌株［2］，经研究具有产生胆固醇氧化酶的能力，但是产量较低，常规的方法很难大幅度提高酶产量，所以制约了它的生产和应用。本研究目的是以不吸水链霉菌梧州新亚种基因组DNA作为模板［3］，利用已知的胆固醇氧化酶基因的保守序列设计简并引物进行PCR扩增，PCR产物与载体连接、转化，构建重组质粒，为不吸水链霉菌梧州新亚种胆固醇氧化酶基因的诱导表达提供可靠的实验数据并打下良好的理论基础［4］。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种供体菌:不吸水链霉菌梧州新亚种(Streptomycesahygroscopicussubsp.wuzhouensis n.subsp)，辽宁省微生物科学研究院提供;宿主菌:E.coli DH5α。……