陈垲钿 宗凌 杜进涛周蔚 姜鸿彦

1 中山大学附属第一医院耳鼻咽喉科医院, 中山大学耳鼻咽喉科学研究所(广州 510080)

遗传性聋是一类具有高度遗传异质性的疾病，开展遗传性聋的基因筛查，可明确大约50%的耳聋病因，为耳聋患者的临床治疗和预防提供参考。对GJB2、SLC26A4、线粒体DNA基因的多位点的筛查可明确大部分基因突变[1～4]。常用筛查方法包括Sanger测序法、基因芯片、限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)、变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC)等。目前对散发的耳聋病例进行大样本的基因筛查及突变频率检测，通常需要对每个样本进行单独的检测，再分析实际突变率，需要耗费大量的人力和物力。焦磷酸测序(Pyrosequencing)技术(Qiagen公司，德国)是一种有效的基因筛查工具，拥有快速、多位点、位点突变频率定量等优点[5～7]。焦磷酸测序技术对多个DNA样本混合后进行同一位点的突变筛查，具有很好的一致性[8～10]。本文旨在研究焦磷酸测序技术的单个样本、多样本混合测序、突变位点频率定量分析在遗传性聋基因筛查中的可行性，进一步制定针对耳聋常见突变位点的焦磷酸测序技术筛查的标准曲线，将这种方法引入遗传性聋的大规模散发病例筛查中，为今后的基因筛查提供参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象及检测方法 选择100例散发非综合征型聋患者的DNA样本。病例基因检测结果均通过Sanger测序法验证。DNA样本采用分光光度计定量和定性。测序位点选择突变频率高发的SLC26A4 IVS7-2A位点和频率低的GJB3 538C、547G位点，采用焦磷酸测序技术对两种不同频率位点的基因病变进行检测。……