王星洁 郝迎涛 孙启峰 赵小刚 彭传亮 姜兴涛 (山东大学第二医院，山东 济南 250033)

食管癌是死亡率很高的恶性肿瘤之一，尽管手术水平不断提高，放疗化疗设备及药物不断更新，食管癌的5年存活率仍较低〔1〕。目前，免疫治疗(如应用抗肿瘤T细胞或肿瘤疫苗诱导的抗体治疗)越来越受到学者的关注。肿瘤细胞表面HLA-Ⅰ类抗原正常表达并且功能完善，对于细胞毒性T细胞(CTL)为主的细胞免疫，在抗肿瘤机制中发挥起主要作用是极为重要的，而抗原加工呈递机制(APM)中的重要分子，抗原处理相关转运蛋白-1(TAP-1)和低分子量蛋白-2(LMP-2)在HLA-Ⅰ分子正常表达中起到重要作用〔2〕。本实验利用免疫组化染色的方法，研究HLA-Ⅰ类分子在食管鳞癌中的表达及其临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料 60例原发性食管癌标本，均为山东大学第二附属医院胸外科1999～2004年手术切除标本，包括周围正常黏膜上皮，病理结果证实为鳞状细胞癌，男41例，女19例，年龄42～83岁。常规石蜡包埋，切片，正常组织与肿瘤组织通过HE染色并镜下观察证实。按照食管癌病理分期标准对肿瘤进行病理分期，其中高分化22例，中分化13例，低分化25例，淋巴结转移阳性24例。患者术前均未接受放化疗治疗。

1.2 主要试剂 单克隆抗体(鼠源性抗体)：EMR8-5(抗HLA-Ⅰ)抗体，工作浓度为1∶100;SY-1(抗LMP2)抗体，工作浓度为1∶200;TO-1(抗 TAP-1)抗体，工作浓度为 1∶100;无关抗体MK2-23，工作浓度1∶100，以上抗体均购自Proteintech公司。通用PV6000 IHC试剂盒(购自北京博乐通生物科技有限公司)：试剂 A，3%H2O2;试剂 B，Polymerized HRP-抗鼠/兔 IgG。

1.3 实验方法 4～5 μm厚切片脱蜡，加3%H2O2试剂A以灭活内源性过氧化物酶，微波抗原修复，正常马血清封闭，再依次加一抗、酶二抗聚合物(试剂B)，37℃孵育，DAB显色，苏木精复染，光镜观察.用PBS作空白对照，无关抗体MK2-23作阴性对照。……