谭 平姚茂君辛益妹马美湖

（1.湖南机电职业技术学院，湖南 长沙 410151；2.华中农业大学食品科学技术学院，湖北 武汉 430070；3.中国人民解放军空军航空医学研究所，北京 100036）

莓茶乙醇提取物的急性毒性研究

谭 平1姚茂君2辛益妹3马美湖2

（1.湖南机电职业技术学院，湖南 长沙 410151；2.华中农业大学食品科学技术学院，湖北 武汉 430070；3.中国人民解放军空军航空医学研究所，北京 100036）

对莓茶乙醇提取物的急性毒性进行研究。取Wistar大鼠40只，清洁级，随机分为2组，每组20只，雌雄各半，以最大耐受量法灌胃给予受试样品组大鼠最大使用浓度和最大灌胃容量的莓茶乙醇提取物，1天2次（相隔4h），连续观察14d。结果表明，受试样品组大鼠毛色，皮肤，粘膜，眼睛，呼吸，循环，自主活动及中枢神经系统、行为表现等均与阴性对照组大鼠无明显差别，整个试验期内无大鼠死亡，莓茶乙醇提取物大鼠口服灌胃的最大耐受量为10.0g/kg大鼠体重；对所有试验大鼠进行大体解剖，组织器官未见有颜色、体积、质地等改变，说明莓茶乙醇提取物的毒性很小，具有较好的食用安全性。

莓茶；显齿蛇葡萄；二氢杨梅素；急性毒性

莓茶是一种野生木质藤本植物，又名甘露茶、藤茶、白茶、龙须茶等，学名显齿蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata），主要分布于湖南、湖北、贵州、云南、江西、广东、福建等省区［1］。莓茶性凉，味甘淡，具有清热解毒、降暑生津、消炎利尿、抗氧化、镇痛等功效，是一种具有独特保健功效和饮用价值的野生天然类茶植物。霉茶在武陵山区有广泛的分布和悠久的饮用历史，千百年来，人们将其幼嫩茎叶加工成保健茶，用于治疗咽喉肿痛、感冒发热、黄疸型肝炎、湿疹、皮炎等症［2，3］。莓茶水提取物主要活性成分为黄酮类化合物3，5，7，3′，4′，5′–六羟基–2，3双氢黄酮醇（二氢杨梅素，dihydromyricetin，DMY），具有抑菌、消炎、镇痛、止咳、祛痰、抗高血压、保肝护肝及解酒、消脂、降糖、抗氧化和增强免疫力等多种药理活性［4－10］。目前，对莓茶乙醇提取物的毒理研究未见报道，本试验对其急性毒性进行了研究，以期为莓茶的研究和进一步开发提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

1.1.1 主要仪器设备

小型粉碎机：LH－08B，浙江新昌红利数控制造厂；

恒温水浴锅：B－220，上海亚荣生化仪器厂；

电子天平：EB－340HW型，日本Shimadzu公司；

超声波清洗器：8200－J4型，日本Yamato公司；

旋转蒸发器：RE－52A，上海亚荣生化仪器厂；

上皿式电子天平：TMP－2型，湘仪天平仪器设备有限公司；

喷雾干燥机：GB－22，日本Yamato公司。

1.1.2 材料

清洁级Wistar大鼠：40只，由北京大学医学部实验动物科学部提供（合格证号为SCXKL［京］2002－0001，动物使用许可证为SYXK［军］2002010），雌雄各半，体重160～180g。

试验大鼠饲养条件：相对湿度50% （±5%），温度22℃（±2℃），光照12h明、12h暗，全屏障清洁级动物实验室内；喂饲全价营养颗粒饲料（北京大学医学部实验动物科学部提供），紫外灭菌后自由摄食；饮水为城市自来水，过滤后装入消毒过的饮水瓶内，自由饮用。

莓茶（按绿茶加工工艺制成）：湖南省保靖县秦简茶科技开发有限公司。

生理盐水注射液（规格：500mL/瓶，批号：060509112），北京双鹤药业股份有限公司。

桶装饮用纯净水：购于北京华玉时尚饮料有限公司。

无水乙醇：化学纯，北京化学试剂公司。

1.2 莓茶乙醇提取物的制备

将莓茶粉碎、过筛，称取一定质量的莓茶粉，按料液比为1∶18（m∶V）加入65%的乙醇溶液，在60℃下，超声波提取40min，抽滤；滤液采用旋转蒸发器进行浓缩，待料液可溶性固形物含量达到30%左右即可；经喷雾干燥得莓茶乙醇提取物，依文献［4］测其二氢杨梅素含量约为70%。

1.3 急性毒理学试验

根据文献［11～13］，将试验用大鼠随机分为受试样品组和阴性对照组，每组20只，雌雄各半，阴性对照组给予生理盐水注射液，受试样品组给予莓茶乙醇提取物。给予受试样品途径：大鼠口服灌胃。给予莓茶乙醇提取物或生理盐水注射液后实验室观察14d，每日记录大鼠的自主活动、外观症状，大鼠的死亡数及死亡时间，对死亡鼠进行尸体解剖，观察主要脏器和组织有无肉眼可见的病理学变化。

2 结果与分析

因受试莓茶乙醇提取物样品溶解度限制，试验中以0.25g/mL比例将受试样品配制成水混悬液，给予受试样品剂量为20.0mL/kg（大鼠体重），1d2次（相隔4h），1d累计剂量为10.0g/kg（大鼠体重）。阴性对照组给予生理盐水注射液20.0mL/kg（大鼠体重），1d2次。

2.1 受试样品组死亡情况

受试样品组大鼠口服灌胃给予受试样品莓茶乙醇提取物，剂量为10.0g/kg大鼠体重；整个试验期14d内无动物死亡发生，受试样品组20只大鼠全部存活。

2.2 对受试样品组体重的影响

第1天受试样品组雌性大鼠平均体重为（172.48±5.35）g，第7天受试样品组雌性大鼠平均体重为（181.77±6.06）g，7d内受试样品组雌性大鼠体重增加了9.29g，第14天受试样品组雌性大鼠平均体重为（190.64±6.23）g，14d内受试样品组雌性大鼠体重增加了18.16g。

第1天受试样品组雄性大鼠平均体重为（174.05±5.90）g，第7天受试样品组雄性大鼠平均体重为（184.90±4.76）g，7d内受试样品组雄性大鼠体重增加了10.85g，第14天受试样品组雄性大鼠平均体重为（194.16±7.86）g，14d内受试样品组雄性大鼠体重增加了20.11g。

受试样品组雌、雄大鼠体重与阴性对照组无明显差别，14d内动物生长情况良好，表明莓茶乙醇提取物对大鼠体重无明显影响。结果见表1。

表1 莓茶乙醇提取物对动物体重的影响（x±s）Table 1 Effects of ethanol extracts from fusty tea to the body weight of mouse

2.3 对受试样品组一般体征的影响

受试样品组大鼠灌胃给予莓茶乙醇提取物（剂量为10.0g/kg大鼠体重）后，连续观察14d，所有受试大鼠的毛发光泽度、大小便、摄食、活动状态和自主活动等均未见异常改变。

2.4 对受试样品组主要脏器的影响

对所有受试大鼠进行大体解剖，未见其组织器官出现颜色、体积和质地等改变。受试样品组大鼠皮肤、粘膜、眼睛、呼吸、循环及中枢神经系统、行为表现等反应与阴性对照组大鼠无明显差别。

3 结论

以受试样品最大使用浓度、受试动物最大灌胃容量，给予Wistar大鼠口服灌胃莓茶乙醇提取物剂量为10.0g/kg大鼠体重，在观察期内受试样品组大鼠毛色，皮肤，粘膜，眼睛，呼吸，循环，自主活动及中枢神经系统、行为表现等均与阴性对照组大鼠无明显差别，整个试验期内无大鼠死亡发生，莓茶乙醇提取物大鼠口服灌胃的最大耐受量为10.0g/kg（大鼠体重）；对所有试验大鼠进行大体解剖，组织器官未见有颜色、体积、质地等改变。本试验结果表明莓茶乙醇提取物急性毒性很小，具有较好的食用安全性，临床应用安全可靠，具有进一步研究开发价值，为莓茶的后续研究提供了试验依据，但急性毒性实验仅数次给药，观察时间较短，故还应结合长期毒性试验的毒性表现及多种检查结果综合分析评价其毒性。

1 中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴补编（第2册）［M］.北京：科学出版社，1983：349～356.

2 王文采.葡萄科新发现［J］.植物分类学报，1979，17（3）：110～112.

3 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编（下册）［M］.北京：人民出版社，1978：789.

4 何桂霞，裴刚，周天达，等.显齿蛇葡萄中总黄酮和二氢杨梅素的含量测定［J］.中国中药杂志，2000，25（7）：423～425.

5 索朗，齐云，吴彬，等.藤茶抗炎、镇痛作用研究［J］.中国民族民间医药杂志，2002，12（56）：172.

6 钟正贤，周桂芬，陈学芬，等.广西瑶族藤茶中双氢杨梅树皮素的保肝作用实验研究［J］.中国中医药科技，2002，9（3）：155～156.

7 李翠苹，曹树稳，余燕影.二氢杨梅素研究进展［J］.化学试剂，2010，32（7），608～612.

8 覃洁萍，钟正贤，周桂芬，等.双氢杨梅树皮素降血糖的实验研究［J］.中国现代应用药学杂志，2001，18（5）：351～353.

9 张友胜，宁正祥，杨书珍，等.显齿蛇葡萄中二氢杨梅树皮素的抗氧化作用及其机制［J］.药学学报，2003，38（4）：241～244.

10 杨书珍，张友胜，宁正祥，等.二氢杨梅素对几种食品常见菌的抑制效果［J］.天然产物研究与开发，2003，15（1）：40～42.

11 中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范（2003版）［S］.北京：中华人民共和国卫生部，2003：177～180.

12 国家食品药品监督管理局.GPT 2－1，中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则［Z］.北京：中国医药科技出版社，2005.

13 李忠海，叶翠层，庞国歌，等.黄皮酸橙果皮提取物对小白鼠胃肠功能的影响［J］.食品与机械，2007，23（6）：52～54.

Study on acute toxicological evaluation of ethanol extracts from fusty tea

TAN Ping1YAO Mao－jun2XIN Yi－mei3MAMei－hu2

（1.Hunan Mechanical and Technical Polytechnic，Changsha，Hunan410151，China；2.College of Food Science and Technology，Huazhong Agricultural University，Wuhan，Hubei430070，China；3.Institute of Aviation Medicine，Chinese PLA Air Force，Beijing100036，China）

The acute toxicological evaluation was studied of ethanol extracts from fusty tea（Ampelopsis grossedentata）.The rats were given the ethanol extracts from fusty tea with the maximum concentration and capacity by gastric perfusion，twice a day，for 14days.The result showed that compared with Wistar control group，there were no abnormal reactions during the observation period on skin，mucosa，coat color，eyes，breath，circulation，locomotor activity，central nervous system，behavior etc.in Wistar sample group，without rats’death，and the maximum tolerance was 10.0g/kg by gastric perfusion.There were no change in the tissues and organs on volume，color and texture，which showed the extracts were low toxic and are better safe to eat.

fusty tea；ampelopsis grossedentata；dihydromyricetin；acute toxicology

10.3969 /j.issn.1003－5788.2011.06.025

国家星火计划项目（编号：2006EA770049）；湖南省自然科学基金资助项目（编号：06JJ5019）；湖南省教育厅高校科研项目（编号：11C0475）

谭平（1968－），男，湖南机电职业技术学院副教授，硕士。E－mail：tan＿xiting＠126.com

2011－08－01